Konfokal intravital mikroskopi av hornhinnan

Hörselns konfokala mikroskopi är en av de moderna metoderna för undersökning. Tillåter att utföra intravital övervakning av hornhinnestillståndet med visualisering av vävnader på cellulär och mikrostrukturell nivå.

Denna metod, på grund av mikroskopets ursprungliga utformning och dess höga upplösning, gör det möjligt att visualisera levande vävnader i hornhinnan, för att mäta tjockleken hos varje lager och för att bedöma graden av morfologiska störningar.

Syftet med hornhinnans mikroskopi

Karaktärisera de morfologiska förändringarna i hornhinnan, som härrör från olika inflammatoriska och dystrofiska sjukdomar, samt från kirurgiska ingrepp och effekterna av CR.

Morfologiska data behövs för att bedöma svårighetsgraden av den patologiska processen, effektiviteten av behandlingen och bestämma taktiken för patienthanteringen.

Indikationer för förfarandet

• Inflammatoriska sjukdomar i hornhinnan ( keratit ).
• Dystrofa sjukdomar i hornhinnan ( keratokonus, Fuchs dystrofi, etc.).
• Syndrom av "torr öga".
• Villkor efter kirurgiska ingrepp på hornhinnan (genom hornhinnetransplantation, keratorfraktiva operationer).
• Villkor förknippade med att ha kontaktlinser.

[1], [2], [3], [4]

Förberedelse

Denna studie är möjlig utan användning av anestetika. En droppe nedsänkningsvätska placeras på linsen i konfokalmikroskoplinsen. Detta eliminerar linsens direkta kontakt med hornhinnan och minimerar risken för epitelskador.

[5], [6], [7], [8], [9],

Teknik konfokal mikroskopi av hornhinnan

Studien utförs på ett konfokalmikroskop ConfoScan 4 (Nider) med en ökning av 500 gånger. Enheten gör att du kan undersöka hornhinnan över hela tjockleken.

Storleken på den undersökta zonen är 440 × 330 μm, skiktets tjocklek är 5 μm. En lins med en dropp gel placeras i hornhinnan för att röra och sätta så att tjockleken på det nedsänkande vätskeskiktet är 2 mm. Enhetsdesignen gör att du kan undersöka hornhinnan i den centrala zonen och dess paracentrala områden.

Kontraindikationer till proceduren

Relativ kontraindikation markerade irritation i ögat mot bakgrund av en akut inflammatorisk process.

[10], [11]

Normal prestanda

Normal morfologisk bild av hornhinnan

Det främre epitelet består av 5-6 lager av celler. Den genomsnittliga tjockleken på hela epitelet är ca 50 μm. Enligt den morfologiska strukturen utmärks följande skikt (från insidan utåt): basal, subuler och ytlig.

• Det innersta (basala) skiktet representeras av små täta cylindriska celler utan synlig kärna. Basalcellens gränser är klara, ljusa.
• Mellanlagret består av 2-3 lager av ryggradiga (vinge) celler med djupa invaginationer, i vilka utväxten av närliggande celler är byggda. Mikroskopiskt är cellgränserna ganska välskälbara och kärnorna kan inte definieras eller vara fuzzy.
• Ytskiktet i epitelet representeras av ett eller två lager av polygonala celler med tydliga gränser och en homogen densitet. Kärnorna är vanligtvis ljusare än cytoplasman, i vilken man också kan skilja en mörkring nära kärnan.

Bland cellerna i ytskiktet skilja mellan mörk och ljus. Den ökade reflektiviteten hos epitelceller indikerar en minskning av ämnesomsättningen i dem och början av deras desquamation.

Bowman membranen är en genomskinlig struktur som inte reflekterar ljus, så det är omöjligt att visualisera det när konfokal mikroskopi utförs.

Subbasisk nerv plexus ligger under Bowman membranet. Normalt ser nervfibrerna ut som ljusa band som löper parallellt på en mörk bakgrund och kontaktar varandra. Reflektivitet (reflektivitet) kan vara ojämn i fiberlängd.

Hornhinnans strom upptar 80 till 90% av hornhinnans tjocklek och består av en cellulär och extracellulär komponent. De grundläggande cellulära elementen i stroma är keratocyter; utgöra cirka 5% av volymen.

Ett typiskt mikroskopiskt mönster av stroma innefattar flera ljusa oregelbundna ovalformade kroppar (keratocytkärnor) som ligger i tjockleken på en transparent mörkgrå eller svart matris. Normalt är visualisering av extracellulära strukturer omöjlig på grund av deras transparens. Stroma kan delas upp i dellager: anterior (ligger direkt under Bowman-membranet och utgör 10% av stromets tjocklek), främre, mellersta och bakre.

Den genomsnittliga densiteten hos keratocyter är högre i den främre stromen, gradvis minskar antalet mot de bakre skikten. Anterior stromal celldensitet nästan två gånger högre än de bakre stromaceller (om densiteten för celler i den främre stroman tas som 100%, då densiteten för den bakre omkring 53,7% av cellerna). I den främre stromen har kärnocellerna av keratocyter en rund bönformad form och i den bakre ovalen och mer långsträckta.

Kärnorna av keratocyter kan skilja sig åt i ljusstyrka. Den olika förmågan att reflektera ljus beror på deras metaboliska tillstånd. Ljusare celler anses vara aktiverade keratocyter ("stressceller"), vars aktiviteter är inriktade på att upprätthålla inre hornhinnost homeostas. I normen och synfältet finns det enstaka aktiverade celler.

Nervfibrer i hornhinnans främre stroma visualiseras som ljusa homogena band, som ofta bildar bifurkationer.

Nedbromsmembranet är normalt transparent och visualiseras inte genom konfokal mikroskopi.

Det bakre epitelet är ett monoskikt av hexagonala eller polygonala platta celler med en likformigt ljus yta mot bakgrund av distinkta mörka intercellulära gränser.

Enheten möjliggör manuell eller automatisk beräkning av cellens densitet, deras område och variationskoefficienten.

Patologiska förändringar i hornhinnans struktur

Keratokonus kännetecknas av signifikanta förändringar i hornhinnans främre epitel och stroma.

[12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20]