Immunologisk forskning inom urologi

Tilldelning av ett immunogram till en urologisk patient innebär att den behandlande läkaren förutsätter förekomst av störningar i immunsystemet. Duplicera bakteriella, virala, fungala infektioner, allergiska reaktioner, kan systemiska sjukdomar vara symtom på dessa störningar, som kännetecknas av ett antal syndrom (infektion, cancer, allergiska, autoimmuna, lymfoproliferativa). En patient kan ha flera syndrom. Till exempel, kan kroniska infektionssjukdomar (infektiös syndrom) orsaka immunbrist och immunbrist kan manifest predisposition för infektionssjukdomar och cancer (Cancer Syndrome). Fördjupning mot infektioner kan ske mot bakgrund av sekundär immunbrist, som utvecklats som ett resultat av en lymfoproliferativ sjukdom, såsom leukemi. Det finns tre huvudgrupper av patologiska förändringar i immunsystemet:

• den kvantitativa eller funktionella insufficiensen av en eller annan immunitetslänk som leder till utvecklingen av ett immunbristtillstånd
• en kränkning i immunets erkännande av antigenet, vilket leder till utvecklingen av autoimmuna processer;
• hyperreaktivt eller "perverterat" immunsvar, manifesterat av utvecklingen av allergiska sjukdomar.

Det finns screening (test av nivå 1) och kvalificering (test av 2 nivåer) metoder för immunodiagnostik. Den förstnämnda finns för att fixa överträdelser i immunsystemet, den senare - för att fastställa mekanismerna som är involverade i deras genomförande i syfte att ytterligare immunkorrigering.

B-cellulär länk av immunitet

Screening metoder

• Bestämning av den relativa och absoluta antalet B-lymfocyter via immunofluorescens eller flödescytometri med användning av monoklonala antikroppar till antigener B-cell (CD19, CD20, varvid CD - kluster av differentiering). B-lymfocytinnehållet är normalt hos vuxna: 8-19% av det totala antalet leukocyter eller 190-380 celler / μl. Ökning av halten av B-lymfocyter sker i akuta och kroniska bakteriella och svampinfektioner, kronisk leversjukdom, systemiska bindvävssjukdomar, kronisk lymfocytisk leukemi, multipelt myelom.
• Bestämning av koncentrationen av immunglobuliner nespespetsificheskih (F, M, G, E) genom enkel radiell immundiffusion, eller turbometrii nefelometri, radioimmunoanalys eller enzymimmunoanalys (EIA). Normer för vuxna: immunoglobulin (Ig) A 0,9-4,5 g / l. IgM 03-3,7 g / 1. IgG 8,0-17 g / 1. En ökning av koncentrationen av immunoglobuliner sker med samma patologiska tillstånd där en ökning av innehållet i B-lymfocyter uppträder. Minska koncentrationen av immunglobuliner är vid medfödd hypogammaglobulinemi, tumörer i immunsystemet, avlägsnande av mjälten, proteinförlust, vid sjukdomar i njurarna eller tarmarna, behandling med cytostatika och immunodepreesantami.

Ange metoder

• Bestämning av cirkulerande immunkomplex i blodet genom selektiv utfällning i polysilenglykol följt av spektrofotometrisk densitetstestning (normalt 80-20 UE). Ökning av cirkulerande immunkomplex är karakteristisk för akuta bakterie-, svamp-, virusinfektioner, autoimmuna, immunkomplexa sjukdomar, serumsjukdom, allergiska reaktioner av typ 3;
• Bestämning av specifika immunoglobuliner i blod i förhållande till bakteriella och virala antigener, deoxiribonukleinsyra (DNA) i autoimmuna sjukdomar, identifiering av spermier (autoimmun infertilitet) och protivopochechnyh antikroppar (pyelonephritis och glomerulonefrit) genom radiell immunodiffusion eller ELISA.
• Bestämning av antispermantikroppar i spermierna [MAR-test (blandad antiglobulinreaktion)], normen är negativ.
• Bestämning av koncentrationen av immunoglobuliner i urinen i syfte att differentiera diagnosen mellan pyelonefrit och glomerulonefrit (selektivitet hos proteinuri).
• Bestämning av IgE i prostatajuice för diagnos av allergisk prostatit genom radiell immunodiffusion eller ELISA. 
• Forskning som svar blasttransformation reaktion av lymfocyter B på en B-cell-mitogen (pokeweed mitogen för stimulering av blasttransformation reaktion av B-lymfocyt i närvaro av T-lymfocyter), varvid standardvärdet på 95-100%.

T-celllänk av immunitet

Screening metoder

• Bestämning av den relativa och absoluta antalet mogna CD3 T-lymfocyt-reaktion genom immunofluorescens eller flödescytofluorometri med användning av anti-SDZ monoklonala antikroppar. Normen för vuxna är 58-76% eller 1100-1700 celler / μl. Att minska antalet T-lymfocyter fel indikatorcellsimmunitet. Detta är karaktäristiskt för flera sekundära och primära immunbrister (kroniska bakteriella och virala infektioner: tuberkulos, förvärvat immunbristsyndrom, cancer, kronisk njursvikt, trauma, stress, åldrande, undernäring, behandling med cytotoxiska läkemedel, joniserande strålning). Öka antalet T-lymfocyter är mot bakgrund av immun hyperaktivitet eller lymfoproliferativa sjukdomar. När inflammation av antalet T-lymfocyter höjs först och därefter sänks. Ingen minskning i T-lymfocyter antyder kronisk inflammation.
• Bedömning av subpopulationer av lymfocyter.
  • Bestämning av antalet T-hjälpare (anti-CD4-antikropp). Normalt är 36-55% eller 400-1100 celler / μl. Öka antalet av dessa celler förekommer i autoimmun sjukdom, Waldenströms sjukdom, immunaktivering antitransplantatsionnogo; minskning av antalet T-hjälparceller inträffar vid kroniska bakteriella, virala, protozoiska infektioner, tuberkulos, förvärvat immunbristsyndrom, maligniteter, brännskador, trauma, undernäring, åldrande, cytostatika behandling, joniserande strålning.
  • Bestämning av antalet T-suppressorer (anti-CD4-antikropp). Normalt är 17-37% eller 300-700 celler / μl. Ökat antal suppressor-T sker under samma betingelser i vilka reducerade antalet T-hjälparceller och deras reduktion under samma betingelser under vilka halten av T-hjälparce celler ökar.
  • Immunoregulatoriskt index CD4 / CD8, i normen 1,5-2,5. Hyperaktivitet vid frekvenser över 2,5 (allergiska och autoimmuna sjukdomar); hypoaktivitet - mindre än 1,0 (predisposition till kroniska infektioner). Vid starten av den inflammatoriska processen stiger det immunoregulatoriska indexet och när det sänker det normaliseras det.

Ange metoder

• Bestämning av antalet naturliga mördare (NK-celler) - anti-CD16 och anti-CD56-antikroppar. Normen för CD 16-lymfocyter är 6-26%, CD56 - 9-19%. Ökning av antalet NK-celler sker i transplantatavstötning, minska - i virusinfektioner, cancer, primära och sekundära immunbrister, brännskador, trauma och stress, behandling med cytostatika och joniserande strålning. 
• Bestämning av antalet T-lymfocyter med receptorn för interleukin-2 (aktiveringsmarkör) - anti-CD25-antikroppar. Normen är 10-15%. En ökning av deras antal observerades i allergiska sjukdomar, avstötning av transplantat, svar på tymusberoende antigener under den akuta primära infektionen, minskning - under samma sjukdomar, som innebär en minskning av antalet NK-celler.
• Undersökning av uttrycket för aktiveringsmarkören - histokompatibilitetsmolekylen i klass II HLA-DR. Ökat uttryck förekommer i inflammatoriska processer, hos patienter med hepatit C, celiacsjukdom, syfilis, akut respiratoriska infektioner.
• Utvärdering av apoptos av lymfocyter. En indikation på beredskap lymfocyt apoptos kan identifieras genom deras expression av ytan Fas-receptorn (CD95) i mitokondrier och bd-2 protoonkogen. Apoptos utvärderades genom lymfocyt bearbetning två fluorescerande färgämnen: propidiumjodid, som binder till DNA-fragmenten och annexin Y, bindning till fosfatidylserin på cellmembranet som uppträder i början av apoptos. Utvärdering av resultaten utförs på en flödescytofluorimeter. Beräkningen av resultaten är baserad på förhållandet mellan celler färgade med olika färgämnen. Ofärgade celler är livskraftiga celler, som är förknippade endast med annexin Y, - tidiga tecken på apoptos, med propidiumjodid och annexin I - sen manifestationer av apoptos, färgning endast propidiumjodid indikerar nekros.
• Utvärdering av proliferationen av T-lymfocyter in vitro.
  • Förändring av cellblastogenes är en reaktion på blasttransformationen av lymfocyter. Leukocyter inkuberas med vilken som helst mitogen av vegetabiliskt ursprung (lektiner). Mer vanligt förekommande fytohemagglutinin i 72 timmar, gör sedan ett smet, fläck det och räkna antalet blaster! Stimuleringsindexet är förhållandet mellan procenten av transformerade celler i försöket (kultur med fytohemagglutinin) till procenten av transformerade celler i kontrollen (odling utan fytohemagglutinin). Reaktionen av blasttransformationen av lymfocyter kan utvärderas genom införlivande av en radioaktiv märkning (ZN-tymdin) i odlade celler, eftersom DNA-syntes ökar vid delning av celler. Störningar i det proliferativa svaret uppträder både i primär och sekundär immunförsvar som är förknippade med infektioner, onkologiska sjukdomar, njursvikt och kirurgiska ingrepp.
  • Utvärdering av dessa studier, uttrycket av aktiveringsmarkörer (CD25, transferrinreceptor till - CD71) -molekyler och MHC klass II HLA-DR, som är i huvudsak frånvarande på vilande T-lymfocyter. T-lymfocyter stimulerades med fytohemagglutinin efter 3 dagar expressionsaktiveringsmarkörer analyserades genom direkt eller indirekt immunofluorescens, flödescytometri med användning av monoklonala antikroppar som utsöndras receptorer.
  • Mätning av mängden mediatorer syntetiseras genom aktiverade T-lymfocyter [interleukin (IL) 2, IL-4, IL-5, IL-6, gamma-interferon, etc], genom radioimmunoanalys eller ELISA. Särskilt viktigt är utvärderingen av koncentrationen av y-interferon och IL-4 som markörer av TH och Th2 i supernatanten av aktiverade kulturer och inom cellen. Om möjligt, är det användbart att bestämma uttrycket av genen för den relevanta cytokin genom nivån av budbärar-ribonukleinsyra i treonin producerande cell- och receptorexpressionsnivåer för de respektive cytokiner.
    
• Reaktionen av inhibering av migrering av lymfocyter. Sensibiliserade T-lymfocyter i reaktionen med antigenfrigörande lymfokiner, inkluderande faktorer. Inhibera migrering av lymfocyter. Inhiberingsfenomenet observeras när mitogen införs i cellkulturen. Utvärdering av graden av inhibering gör det möjligt att bedöma lymfocyternas förmåga att frigöra cytokiner. Vanligtvis är migrationsfrekvensen beroende på den specifika mitogen 20-80%.
• Utvärdering av cytotoxicitet hos NK-celler. Bestäm förmågan hos naturliga mördarceller att döda målceller i erytromyeloidlinjen K-562. Om antikroppsberoende cytotoxicitet utvärderas används målceller belagda med IgG-antikroppar. Målceller märks med 3H-uridin och inkuberas med effektorceller. Målcellernas död beräknas från frisättningen av den radioaktiva märkningen i lösningen. Reduktion av cytotoxicitet sker med maligna neoplasmer. I vissa fall, när en prognos av effektiviteten av behandling med interleukiner krävs, utvärderas cytotoxiciteten hos NK-celler när de inkuberas med vissa cytokiner.

Undersökning av funktionen av fagocyter

Screening metoder

Absorption intensitets fagocyter Studie av mikrobiella celler (fagocytos av latexpartiklar, provkultur aureus, Escherichia coli eller mikroorganismer som isolerats från patienten). Genom centrifugering utvunna hepariniserade blodleukocyter uppslamningen sattes IV blodserum under opsoniseringsanalyser (opsoniner - proteiner som förstärker fagocytos). Den mikrobiella suspensionen utspädes, blandas med leukocyter och inkuberas i 120 min, provtagning för analys efter 30,90,120 min efter inkubationens början. Av de valda leukocyt-suspensionerna gör smuts. Bestäm följande indikatorer för fagocytos:

• fagocytiskt index - andelen celler som gick in i fagocytos inom 30 min och 120 min inkubation; normativt värde av fagocytiskt index (30) 94% av fagocytiskt index (120) - 92%;
• fagocytiskt tal - det genomsnittliga antalet bakterier som är intracellulära; det normativa värdet av fagocytiskt tal (30) 11%, fagocytiskt tal (120) - 9,8%;  
• fagocytiskt antal koefficienter - förhållandet fagocytiskt tal (30) till fagocytiskt tal (120); normal 1,16;
• det bakteriedödande indexet för neutrofiler är förhållandet mellan antalet mikrober som dödats inuti fagocyterna till det totala antalet mikrober som tagits upp; i normen av 66%.

Ange metoder

• Undersökning av baktericidaktiviteten hos fagocyter i testet med nitrosintetrazolium (NST) är NST-testet. Till leukocyterna tillsätts färgämne av nitrous tetrazoliumgult. När färgämnet absorberas av neutrofilen sker reduktionsprocessen under verkan av fria radikaler av syre, vilket resulterar i en blå färgning. Reaktionen utförs i en platta platta med 96 brunnar. I de första tre brunnarna med en blandning av HCT och leukocyter tillsätts Hanks-lösning (spontan HCT) i de senare latexpartiklarna; inkubera vid 37 ° C i 25 minuter. Resultaten läses vid 540 nm på läsaren och uttrycks i konventionella enheter. Beräkna stimuleringsfaktorn ( _Kst ), lika med förhållandet mellan optisk densitet i de stimulerade brunnarna och den genomsnittliga optiska densiteten i brunnarna utan stimulering. Hos friska personer, _{HCT spont} = 90 ± 45 UE, NST _Stim = 140 ± 60 UE. K _v = 1,78 ± 0,36.
• Undersökning av vidhäftningsmolekyler. Med hjälp av flödescytofluorimetri bestäms uttrycket av ytantigener CDlla / CD18, CDllb / CD18, CDllc / CD18. Immunficienser med brott mot vidhäftning uppenbaras av återfallande infektioner, långsam läkning av sår och frånvaro av pus i infektionsfältet.

Undersökning av komplementsystemet

Screening metoder

Bestämning av komplementets hemolytiska aktivitet - en studie av den klassiska vägen för komplementaktivering. Olika utspädningar av patientens serum och en hälsosam person läggs till erytrocyterna hos ett får belagt med antikroppar. En enhet av hemolytisk aktivitet tas som invers av utspädningen av serum, i vilket 50% av erytrocyterna förstörs. Graden av hemolys utvärderas fotometriskt genom utbytet av hemoglobin i lösningen. Reduktion av hemolytisk aktivitet av komplement observeras i systemisk lupus erythematosus med njursamverkan, akut glomerulonefrit. Kombinerade immunbrist, myasthenia gravis, viral hepatit, lymfom, ökning - med obstruktiv gulsot, thyroidit Hashimoto. Reumatism, reumatoid artrit, nodulär periarterit. Dermatomyosit, myokardinfarkt, ulcerös kolit, Reiter syndrom, gikt.

Ange metoder

• Bestämning av komplementkomponenter. Den kvantitativa bestämningen utförs genom metoden för radiell immunodiffusion och nephelometri.
  Studien är inte informativ, om inte de antigena egenskaperna hos komplementkomponenterna förändras.
• Man fann att Clq-komponenten i komplementet förstärker fagocytos och medierar cellulär cytotoxicitet. Dess minskning sker i sjukdomar i immunkomplex, systemisk lupus erythematosus, purulenta infektioner och tumörer.
• C3-komponenten deltar i aktiveringen av den klassiska och alternativa komplementvägen. Reduktion av dess koncentration är förknippad med kroniska bakteriella och svampinfektioner, närvaron av cirkulerande eller vävnadsimmunkomplex.
• C4-komponenten deltar i aktiveringen av den klassiska vägen. Reduktion av dess koncentration är associerad med en långvarig aktivering av komplement med immunkomplex och en minskning av koncentrationen av C1-hämmaren, vilken styr aktiveringen av den klassiska komplementvägen. C4-brist förekommer med systemisk lupus erythematosus, en ökning av C4 uppträder med njursjukdom, transplantatavstötning, akut inflammation och sjukdomar i mag-tarmkanalen.
• C5a är ett litet fragment av C5-molekylen, splittras från det som ett resultat av aktivering av komplementsystemet. Ökad koncentration uppträder med inflammation, sepsis, atopisk och allergisk sjukdom.
• Cl-hämmare är en multifunktionell faktor. Det styr aktiveringen av C1-komponenten i komplementet, hämmar aktiviteten hos kallikrein, plasmin och aktiverad faktor Hageman, proteaser Cls och Or. Brist på C1-hämmare leder till angioödem.
• kompletterande studier. Till det normala serum som saknar någon komplementkomponent tillsätts testserumet och komplementets hemolytiska aktivitet bestäms. Om den hemolytiska aktiviteten inte återställs till normal anses det att aktiviteten för denna komplementkomponent i testserumet reduceras.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]