Hepatit A -virus

Viral hepatit A är en mänsklig infektionssjukdom som kännetecknas av en övervägande leverskada och manifesterad klinisk förgiftning och gulsot. Hepatit A-virus detekterades 1973 av S. Feinstone (och andra) genom att använda metoden för immunelektronmikroskopi och genom att infektera apor - schimpanser och marmosetter. Metoden immun elektronmikroskopi är att avföringen till filtratet sattes hepatit En patient specifik antikropp (konvalescentserum) och fällningen underkastades elektronmikroskopi. På grund av interaktionen mellan virus med specifika antikroppar genomgår de specifik aggregering. I detta fall är de enklare att upptäcka, och aggregering under påverkan av antikroppar bekräftar patogenens specificitet. Upptäckten av S. Feinstone bekräftades i experiment på volontärer.

Hepatit A-viruset har en sfärisk form, diametern för virionen är 27 nm. Genomet representeras av en enkelsträngad positiv RNA med en massa av 2,6 MD. Superkapsid är frånvarande. Symmetri typen är kubisk - icosahedron. Kapsiden har 32 kapsomer, den bildas av fyra polypeptider (VP1-VP4). Vid dess egenskaper hör hepatit A-viruset till släktet Heparnovirus, familjen Picornaviridae. Antigeniskt är hepatit A-virus (HAV-hepatit A-virus) homogent. HAV multipliceras väl i kroppen av chimpanser, baboons, hamadryls och spelande apor (marmosets). Under lång tid kunde viruset inte odla. Bara på 1980-talet. Det var möjligt att erhålla cellkulturer i vilka HAV propagerar. Initialt användas för dessa ändamål, immortaliserad embryonal njurcellinje rhesus macaque (kultur FRhK-4), och nu - transplanterade njuren cellinje av grön apa (Kultur 4647).

Enligt rekommendationer från WHO-experter antogs följande nomenklatur för markörer av hepatit A-virus: hepatit A-virus-NAU-antikroppar mot hepatit A-virus: anti-NAV-IgM och anti-NAV-IgG.

HAV är små partiklar med en diameter av 27-30 nm, som har icosahedral symmetri och har homogenitet. På elektrondiffraktionsmönstret erhållet genom metoden för immunaggregation detekteras elektron-täta partiklar med ytligt placerade symmetriskt anordnade kapsomer. Med negativ kontrastering detekteras både fullständiga och tomma partiklar i beredningarna. Nukleocapsid NAV, till skillnad från influensa, har inte ytproteser och membran. Det är också viktigt att virion HAV inte har en hjärtformad struktur.

Enligt fysikalisk-kemiska egenskaper hos hepatit A-virus är relaterad till familjen Picornaviridae, genus Enterovirus med atomnummer 72. Men denna taxonomi var alltför ovanligt, och som fann det möjligt att lämna terminologin "hepatit A-virus".

Liksom alla virus av familjen Picornaviridae innehåller hepatit A-viruset ribonukleinsyra. Vissa laboratorier har visat möjligheten att klona genomet av hepatit A-viruset, vilket öppnar utsikterna att erhålla vaccinpreparat.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7],

Resistens av hepatit A-viruset

Viruset är relativt motståndskraftigt mot höga temperaturer, syror, fettlösningsmedel (det finns inga lipider), desinfektionsmedel, det tolererar en låg temperaturbrunn. Allt detta bidrar till långsiktigt bevarande i den yttre miljön. Vid rumstemperatur överlever den i flera veckor, vid 60 ° C förlorar partiellt infektivitet efter 4-12 timmar helt - efter några minuter vid 85 ° C. Mycket motståndskraftig mot klor, på grund av vilken det kan tränga in i kranvattnet genom barriärerna för vattenreningsverk.

Sammanfattar alla data, vi kan karakterisera hepatit A-viruset enligt följande:

• Den naturliga mästaren är mannen;
• försöksdjur - marmozet, chimpansa;
• infektionskälla - avföring
• sjukdom - epidemi och endemisk
• överföringsvägen är fekal-oral;
• inkubationsperiod - 14-40 dagar;
• övergång till kronisk hepatit - inte noterat.

Immunologiska egenskaper hos NAV är som följer:

• Prototypstammar - Ms-1, CR-326, GVG. Alla är immunologiskt lika eller identiska;
• Antikroppar - IgM och IgG produceras som svar på införandet av virusets strukturella proteiner och är skyddande;
• I Den trofiska verkan av humant serum y-globulin - skyddar eller dämpar sjukdomen under administreringsförhållandet före infektion eller under inkubationsperioden.

Fysikalisk-kemiska egenskaper hos NAU är följande:

• Morfologi är en kulaformig partikel med en kubisk symmetri, kapsidan består av 32 kapsomer;
• Diametern är 27-30 nm;
• Tätheten i CsCl (g / cm3) är 1,38-1,46 (öppna partiklar), 1,33-1,34 (moget virion), 1,29-1,31 (omogna virioner, tomma partiklar);
• Sedimenteringskoefficienten är 156-160 mogna virioner;
• Nukleinsyra - enkelsträngad, linjär RNA;
• Relativ molekylvikt - 2,25 106-2,8 106KD;
• Antalet nukleotider är 6 500-8 100.

NAV: s stabilitet i fysikalisk-kemiska effekter är följande:

• Kloroform, eter - är stabil;
• Klor, 0,5-1,5 mg / l, 5 ° C, 15 min - partiell inaktivering;
• Kloramin, 1 g / l, 20 ° C, 15 min - fullständig inaktivering;
• Formalin, 1: 4000, 35-37 ° С, 72 timmar - fullständig inaktivering, 1: 350, 20 ° С, 60 min - partiell inaktivering.

Temperatur:

• 20-70 ° C - stabil;
• 56 ° С, 30 minuter - det är stabilt;
• 60 ° С, 12 timmar - partiell inaktivering
• 85 ° С, 1 min - full inaktivering;
• Autoklavering, 120 ° C 20 minuter - fullständig inaktivering
• Torr värme, 180 ° C, 1h - fullständig inaktivering;
• UV, 1,1 W, 1 min - fullständig inaktivering.

De presenterade data visar att de fysikalisk-kemiska egenskaperna hos hepatit A-viruset är närmast enterovirus. Liksom andra enterovirus är HAV resistent mot många desinfektionslösningar, fullständigt inaktiverad i flera minuter vid 85 ° C och autoklaveras.

Det visade sig att hepatit A-virus kan föröka sig i primära och kontinuerliga monoskiktsodlingar av humana cellinjer och apa. Särskilt aktiva reproduktion av hepatit A-virus i in vitro kulturer observeras vid användning som utgångsmaterial extraherar leverpatient apor. Emellertid bör det noteras att i alla experiment enligt en reproduktion av hepatit A-virus i in vitro kulturer anmärkningsvärd lång inkubationstid i primära passager (-10 till 4 veckor), därefter ackumulering av virala genetiska material ökar, men de absoluta värdena är mycket minor som ger upphov till många forskare talar om en ofullständig replikationen av hepatit A-virus i vävnadskulturer.

Sammanfattande litteraturdata om reproduktion av hepatit A-virus från icke-rotkulturer, det kan sägas att faktumet med en långvarig erfarenhet av HAV in vitro är otvivelaktigt. Optimala förutsättningar för en stabil hög nivå av viral replikation har inte slutgiltigt identifierats, och detta begränsar studien av dess biologiska egenskaper, produktion av en källa till reagenser för framställning av diagnostik och utformning av vacciner.

Samtidigt kan mer optimistiska bedömningar om detta problem hittas i litteraturen. Lösningen av alla problem relaterade till odlingen av hepatit A-viruset är en fråga för den närmaste framtiden. När man studerar de optimala betingelserna HAV förökning i cellkultur embryonala njur rhesusapor avslöjade två faser: fasen för infektiös virusproduktion (upp till 6-8 dagar vid 5:e passagen) och fasen för intensiv ackumulering av viralt antigen. Det visas också att den mest signifikanta ackumuleringen av virusantigenet sker under betingelserna för så kallad rulleodling (roterande flaskor). På detta sätt öppnas stora möjligheter att erhålla ett kulturellt antigen i stora mängder, och följaktligen kommer ett utgångsmaterial för framställning av diagnostiska system och framställning av vaccinpreparat att uppträda.

Epidemiologi av hepatit A

Hepatit A-virus har hög patogenitet för människor. Enligt WHO: s slutsats (1987) är sjukdomen tillräcklig för att endast infektera en virion. Den praktiska smittsamma dosen är emellertid sannolikt mycket högre. Källan till infektion är bara en infekterad person. Viruset frigörs i stora mängder med avföring 12-14 dagar före utseende av gulsot och inom 3 veckor. Icteric period. Betydande skillnader i patogenas isolering hos patienter med icteric, gulsot och asymptomatiska former av hepatit A har inte identifierats. Infektionsmetoden är fekal-oral, huvudsakligen vattenhaltig, och även genom hushålls- och matvägar. Infektionsmetoden är fekal-oral, huvudsakligen vattenhaltig, och även genom hushålls- och matvägar. Den huvudsakliga (primära) vägen för överföring av viruset är vatten. Det är också möjligt att luftburna infektioner. Känsligheten hos befolkningen är universell. För det mesta är barn under 14 år sjuk. Sjukdomen har en uttalad höst-vinter säsong.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

Symptom på hepatit A

Inkubationstiden varierar från 15 till 50 dagar, beroende på storleken av den dos infekterande viruset, men i genomsnitt 28-30 dagar. Väl inne i kroppen, hepatit A-virus replikerar i de regionala lymfkörtlarna, i blodet och sedan till leverceller och orsakar diffus akut hepatit som åtföljs av lesioner av lever hepatocyter och retikuloendoteliala celler och en minskning i dess avgiftning och barriärfunktioner. Hepatocyte skador uppstår inte på grund av den direkta effekten av viruset, som ett resultat av immunpatologiska mekanismer. Den mest typiska bild av hepatit A är akut ikteriska cyklisk form: inkuberingsperioden den prodromala (preicteric), gulsot och konvalescensperiod. Men i foci av infektion avslöjar ett stort antal patienter med asymptomatiska och anicteric former av infektion, vilkas antal dominerar över ikteriska ( "isberg fenomen").

Post-infektiös immunitet är stark och långvarig, orsakad av virus-neutraliserande antikroppar och immunförsvar.

Mikrobiologisk diagnos av hepatit A

Diagnos av hepatit A (utom infektion djur - schimpanser marmozet, babianer, som vi har) baserade på olika immunologiska metoder: DGC immunofluorescensmetod, hemagglutination immun vidhäftning (komplex av viralt antigen + antikropp i närvaro av komplement adsorberad på erytrocyter och orsakar deras vidhäftning) . Emellertid, är begränsad tillämplighet av dessa metoder på grund av avsaknaden av specifika virala antigener och immunofluorescens reaktion kräver leverbiopsier, vilket är oönskat. Pålitligt och specifikt är metoden för immunelektronmikroskopi, men det är mycket mödosamt. Därför, tills den enda acceptabla metoden för den immunologiska reaktionen är immunsorbentanalys fast fas i form av IPM, eller RIM, särskilt i modifiering av den "infångande" av immunoglobulin M. I vårt land för detta ändamål föreslagna testsystem - "DIAG-A-GEO". Arbetsprincipen för detta testsystem är som följer. På väggarna i polystyren lunochek sorberas första antikropparna till immunoglobuliner av klass M (antiimmunoglobuliny M) sätts sedan till den undersökta patientserum. Om det finns antikroppsklass IgM, kommer de att binda till en antikropp-Ti-M, sattes sedan till ett särskilt viralt antigen (hepatit A-virus), som erhålles genom odling i cellkultur. Systemet sköljs, och därtill sättes antivirala antikroppar märkta med pepparrotsperoxidas. Om alla fyra komponenterna i systemet interagerar, uppstår en fyra-lags "smörgås":

• antiimmunoglobuliner M,
• immunoglobuliner M (mot hepatit A-virus - i patientens testserum)
• viral antigen,
• antivirala antikroppar märkta med ett enzym.

För att detektera detta komplex tillsätts ett substrat för enzymet till lunetterna. Under enzymets inverkan förstörs det och en färgad produkt bildas. Färgens intensitet kan mätas kvantitativt med en spektrofotometer eller fotokalorimeter.

Fördelen med metoden för "infångning" av IgM är att antikroppar av denna klass av immunoglobuliner uppträder vid det primära immunsvaret och indikerar ett aktivt infektionsstadium, de försvinner efter den överförda sjukdomen. Antivirala antikroppar som tillhör klassen IgG kvarstår däremot länge efter sjukdomen, vilket ger den förvärvade immuniteten. För detektion av hepatit A-virus föreslås en DNA-probmetod: en komplementär vRNA-prob används som en prob.

Behandling av hepatit A

På grund av det faktum att interferonproduktionen störs i viral hepatit, är behandlingen av hepatit A baserad på användningen av interferon och inducerar dess endogena synteseamixin.

Särskilt förebyggande av hepatit A

Tidigare i stor utsträckning seroprevention hepatit A med användning av gammaglobulin inte är motiverad, var emellertid tonvikten på håll immuniseringen genom vaccination mot hepatit A. För detta ändamål utvecklas olika varianter av vacciner och används redan. I Ryssland erhölls en effektiv vaccin mot hepatit A tillbaka 1995, och nu har den framgångsrikt tillämpats.