Hepatit A-virus

Viral hepatit A är en infektionssjukdom hos människor, som främst kännetecknas av leverskador och kliniskt manifesteras av berusning och gulsot. Hepatit A-viruset upptäcktes 1973 av S. Feinstone (et al.) med hjälp av immunelektronmikroskopimetoden och genom infektion av apor - schimpanser och silkesapor. Kärnan i immunelektronmikroskopimetoden är att specifika antikroppar (konvalescentserum) tillsätts till filtratet av avföringen från en patient med hepatit A och sedimentet utsätts för elektronmikroskopi. På grund av virusens interaktion med specifika antikroppar genomgår de specifik aggregering. I detta fall är de lättare att upptäcka, och aggregering under påverkan av antikroppar bekräftar patogenens specificitet. S. Feinstones upptäckt bekräftades i experiment på frivilliga.

Hepatit A-viruset är sfäriskt, viriondiametern är 27 nm. Genomet representeras av enkelsträngat positivt RNA med mm 2,6 MD. Det finns ingen superkapsid. Symmetritypen är kubisk - ikosaeder. Kapsiden har 32 kapsomerer, den bildas av fyra polypeptider (VP1-VP4). Enligt dess egenskaper tillhör hepatit A-viruset släktet Heparnovirus, familjen Picornaviridae. Antigenmässigt är hepatit A-viruset (HAV - hepatit A-virus) homogent. HAV reproducerar sig väl i kroppen hos schimpanser, babianer, hamadryasbabianer och silkesapor. Under lång tid kunde viruset inte odlas. Först på 1980-talet var det möjligt att erhålla cellkulturer där HAV reproducerar sig. Ursprungligen användes kontinuerliga cellinjer av rhesusmakakembryo-njure (kultur FRhK-4) för dessa ändamål, och nu används en kontinuerlig cellinje av gröna apanjurceller (kultur 4647).

Enligt rekommendationer från WHO-experter har följande nomenklatur för hepatit A-virusmarkörer antagits: hepatit A-virus - HAV-antikroppar mot hepatit A-virus: anti-HAV IgM och anti-HAV IgG.

HAV är en liten partikel med en diameter på 27-30 nm, med ikosaedrisk symmetri och homogenitet. Elektronogrammet som erhålls med immunaggregeringsmetoden avslöjar elektrontäta partiklar med ytligt placerade symmetriskt arrangerade kapsomerer. Vid negativ kontrast avslöjas både fulla och tomma partiklar i preparaten. Nukleokapsiden hos HAV, till skillnad från influensa, har inga ytliga utbuktningar och ett membran. Det är också viktigt att HAV-virionet inte har en hjärtformad struktur.

Baserat på dess fysikalisk-kemiska egenskaper klassificeras hepatit A-viruset som tillhörande picornavirusfamiljen, enterovirussläktet med serienummer 72. Denna taxonomi visade sig dock vara för ovanlig, och WHO ansåg det möjligt att behålla terminologin ”hepatit A-virus”.

Liksom alla virus i familjen Picornaviridae innehåller hepatit A-viruset ribonukleinsyra. Vissa laboratorier har visat möjligheten att klona hepatit A-virusets genom, vilket öppnar upp möjligheten att erhålla vacciner.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Resistens mot hepatit A-virus

Viruset är relativt resistent mot höga temperaturer, syror, fettlösningsmedel (inga lipider), desinfektionsmedel och tolererar låga temperaturer väl. Allt detta bidrar till dess långsiktiga bevarande i den yttre miljön. Vid rumstemperatur överlever det i flera veckor, vid 60 °C förlorar det delvis sin smittsamhet efter 4–12 timmar och helt efter några minuter vid 85 °C. Det är mycket resistent mot klor, vilket gör att det kan tränga in i kranvatten genom barriärerna i vattenreningsanläggningar.

Sammanfattningsvis kan vi karakterisera hepatit A-viruset enligt följande:

• den naturliga värden är människan;
• försöksdjur - silkesapor, schimpanser;
• infektionskällan är avföring;
• sjukdomen är epidemisk och endemisk;
• överföringsväg: feko-oral;
• inkubationsperiod - 14-40 dagar;
• övergång till kronisk hepatit - observeras inte.

De immunologiska egenskaperna hos HAV är följande:

• Prototypiska stammar - Ms-1, CR-326, GВG. Alla är immunologiskt lika eller identiska;
• Antikroppar - IgM och IgG, produceras som svar på införandet av virusets strukturella proteiner och är skyddande;
• I. Den skyddande effekten av humant serumgammaglobulin - förebygger eller försvagar sjukdomen om det administreras före infektion eller under inkubationsperioden.

De fysikalisk-kemiska egenskaperna hos NAU är följande:

• Morfologi: skallös sfärisk partikel med kubisk symmetri, kapsid består av 32 kapsomerer;
• Diameter - 27-30 nm;
• Densitet i CsCl (g/cm3) - 1,38-1,46 (öppna partiklar), 1,33-1,34 (mogna virioner), 1,29-1,31 (omogna virioner, tomma partiklar);
• Sedimentationskoefficient - 156-160 mogna virioner;
• Nukleinsyra är ett enkelsträngat, linjärt RNA;
• Relativ molekylvikt - 2,25 10⁶-2,8 10⁶KD;
• Antalet nukleotider är 6 500–8 100.

HAV:s stabilitet under fysiska och kemiska påverkan är följande:

• Kloroform, eter - stabil;
• Klor, 0,5–1,5 mg/l, 5 °C, 15 min – partiell inaktivering;
• Kloramin, 1 g/l, 20 °C, 15 min - fullständig inaktivering;
• Formalin, 1:4000, 35–37 °C, 72 timmar – fullständig inaktivering, 1:350, 20 °C, 60 minuter – partiell inaktivering.

Temperatur:

• 20–70 °C – stabil;
• 56 °C, 30 min - stabil;
• 60 °C, 12 timmar - partiell inaktivering;
• 85 °C, 1 min - fullständig inaktivering;
• Autoklavering, 120 °C. 20 min - fullständig inaktivering;
• Torr värme, 180 °C, 1 timme - fullständig inaktivering;
• UFO, 1,1 W, 1 min - fullständig inaktivering.

De presenterade uppgifterna visar att hepatit A-viruset, vad gäller sina fysikalisk-kemiska egenskaper, är närmast likt enterovirus. Liksom andra enterovirus är HAV resistent mot många desinfektionslösningar och inaktiveras helt inom några minuter vid 85 °C och autoklavering.

Det har bevisats att hepatit A-virus kan reproducera sig i primära och kontinuerliga monolagerlinjer av cellkulturer från människor och apor. Särskilt aktiv reproduktion av hepatit A-viruset i in vitro-kulturer observeras när leverextrakt från sjuka apor används som utgångsmaterial. Det bör dock noteras att i alla experiment på reproduktion av hepatit A-viruset på in vitro-kulturer uppmärksammas den långa inkubationsperioden under primära passager (upp till 4-10 veckor), därefter ökar ackumuleringen av viralt genetiskt material, men de absoluta värdena förblir mycket obetydliga, vilket ger anledning för många forskare att tala om ofullständig replikation av hepatit A-viruset i vävnadskulturer.

Sammanfattningsvis kan man säga att det råder tvivel om att hepatit A-viruset kan överleva på lång sikt in vitro. Optimala förhållanden för en stabil och hög nivå av virusreplikation har inte slutgiltigt identifierats, vilket hindrar studier av dess biologiska egenskaper och möjligheterna att få fram reagens för diagnostik och vaccindesign.

Samtidigt kan mer optimistiska bedömningar av detta problem hittas i litteraturen. Lösningen på alla frågor relaterade till odling av hepatit A-virus är en fråga för den närmaste framtiden. När man studerade de optimala förhållandena för reproduktion av HAV i kulturen av embryonala njurceller från rhesusmakaken identifierades två faser: produktionsfasen av det infektiösa viruset (upp till 6-8 dagar vid nivån av den 5:e passagen) och fasen med intensiv ackumulering av det virala antigenet. Det visades också att den mest betydande ackumuleringen av det virala antigenet sker under förhållandena med så kallad rullodling (roterande kolvar). Denna metod öppnar upp stora möjligheter att erhålla kulturellt antigen i stora mängder, och följaktligen kommer källmaterialet för framställning av diagnostiska system och tillverkning av vacciner att framträda.

Epidemiologi för hepatit A

Hepatit A-viruset är mycket patogent för människor. Enligt WHO (1987) räcker det med infektion med bara ett virion för att orsaka sjukdomen. Den praktiska smittdosen är dock förmodligen mycket högre. Den enda smittkällan är en infekterad person. Viruset utsöndras i stora mängder med avföring 12–14 dagar före gulsot och under de 3 veckorna av den ikteriska perioden. Inga signifikanta skillnader i utsöndringen av patogenen hos patienter med ikteriska, anikteriska och asymptomatiska former av hepatit A har hittats. Smittvägen är fekal-oral, huvudsakligen vattenburen, samt hushålls- och livsmedelsburen. Smittvägen är fekal-oral, huvudsakligen vattenburen, samt hushålls- och livsmedelsburen. Den huvudsakliga (primära) överföringsvägen för viruset är vattenburen. Infektion via luftburna droppar är också möjlig. Befolkningens känslighet är universell. Mestadels barn under 14 år drabbas. Sjukdomen har en uttalad höst-vinter-säsongsbundenhet.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ]

Symtom på hepatit A

Inkubationstiden varierar från 15 till 50 dagar, beroende på virusets smittsamma dos, men är i genomsnitt 28–30 dagar. Väl i kroppen förökar sig hepatit A-viruset i de regionala lymfkörtlarna, penetrerar blodet och sedan levercellerna och orsakar akut diffus hepatit, vilket åtföljs av skador på hepatocyter och retikuloendoteliala element i levern samt en minskning av dess avgiftnings- och barriärfunktioner. Skador på hepatocyter uppstår inte på grund av virusets direkta verkan, utan som ett resultat av immunopatologiska mekanismer. Den mest typiska bilden av hepatit A är en akut ikterisk cyklisk form: inkubationsperiod, prodromal (pre-ikterisk), ikterisk period och konvalescens. I infektionsområdet upptäcks dock ett stort antal patienter med anikteriska och asymptomatiska infektionsformer, vars antal dominerar betydligt över ikteriska ("isbergsfenomen").

Immuniteten efter infektion är stark och långvarig och orsakas av virusneutraliserande antikroppar och immunminnesceller.

Mikrobiologisk diagnostik av hepatit A

Diagnostik av hepatit A (förutom infektion hos djur - schimpanser, silkesapor, babianer, som vi inte har) baseras på olika immunologiska metoder: RSC, immunofluorescensmetod, hemagglutination av immunadhesion (komplexet av viralt antigen + antikropp i närvaro av komplement adsorberas på erytrocyter och orsakar deras adhesion). Möjligheterna att använda dessa metoder är dock begränsade på grund av bristen på specifika virala antigener, och immunofluorescensreaktionen kräver leverbiopsi, vilket är oönskat. Metoden med immunelektronmikroskopi är tillförlitlig och specifik, men den är mycket arbetsintensiv. Därför är den enda acceptabla immunologiska reaktionen hittills metoden med immunosorbentanalys av den fasta fasen i form av IFM eller RIM, särskilt vid modifiering av "infångning" av immunoglobuliner av klass M. I vårt land har ett testsystem föreslagits för detta ändamål - "DIAGN-A-HEP". Principen för detta testsystems funktion är följande. Först sorberas antikroppar mot immunglobuliner av klass M (antiimmunglobuliner M) på väggarna i polystyrenbrunnarna, sedan tillsätts patientens serum som ska testas. Om det innehåller IgM-antikroppar binder de till antikroppar av klass M, sedan tillsätts ett specifikt viralt antigen (hepatit A-virus), vilket erhålls genom odling i cellkultur. Systemet tvättas och antivirala antikroppar märkta med pepparrotsperoxidas tillsätts. Om alla fyra komponenterna i systemet interagerar bildas en fyrskiktad "sandwich":

• antiimmunoglobuliner M,
• immunoglobuliner M (mot hepatit A-viruset - i patientens serum som studeras),
• viralt antigen,
• enzymmärkta antivirala antikroppar.

För att detektera detta komplex tillsätts ett substrat för enzymet till brunnarna. Under enzymets inverkan förstörs det och en färgad produkt bildas. Färgens intensitet kan mätas kvantitativt med hjälp av en spektrofotometer eller fotokolorimeter.

Fördelen med IgM-"infångningsmetoden" är att antikroppar av denna klass av immunglobuliner uppträder under det primära immunsvaret och indikerar infektionens aktiva stadium, de försvinner efter att sjukdomen har uppstått. Antivirala antikroppar som tillhör IgG-klassen kvarstår däremot länge efter att sjukdomen har uppstått och ger förvärvad immunitet. En DNA-probmetod har föreslagits för att detektera hepatit A-virus: komplementärt vRNA-DNA används som prob.

Behandling av hepatit A

På grund av att interferonproduktionen störs vid viral hepatit, baseras behandlingen av hepatit A på användning av interferon och induceraren av dess endogena syntes, amixin.

Specifik förebyggande av hepatit A

Tidigare allmänt använd seroprofylax mot hepatit A med gammaglobulin motiverade inte sig själv, därför lades huvudtyngden på att genomföra vaccinationsprofylax, vaccination mot hepatit A utförs. För detta ändamål utvecklas och används redan olika typer av vacciner. I Ryssland erhölls ett effektivt vaccin mot hepatit A redan 1995, och det används nu framgångsrikt.