Polymeraskedjereaktion (PCR) vid diagnos av infektionssjukdomar

PCR - en av de metoder för DNA-diagnostik gör det möjligt att öka antalet kopior av en detekterbar del av genomet (DNA) av bakterier eller virus är en miljon gånger med användning av ett DNA-polymerasenzym. Segmentet av nukleinsyran som testats för ett givet genom multipliceras (amplifieras) många gånger vilket tillåter det att identifieras. Först, en DNA-molekyl av bakterier eller virus genom uppvärmning uppdelad i två kedjor, sedan i närvaro av de syntetiserade DNA-primrarna (sekvens av nukleotider som är specifika för det definierade genomisk) är bindande dem med komplementära sträckor av DNA, syntetiserat den andra strängen av nukleinsyran efter varje primer i närvaro av ett termostabilt DNA-polymeras . Två DNA-molekyler erhålles. Processen upprepas många gånger. För diagnos är en molekyl av DNA, det vill säga en bakterie eller en viral partikel, tillräcklig. Omsättning av ett ytterligare steg - DNA-syntes på den RNA-molekyl med användning av enzymet omvänt transkriptas - har gjort det möjligt att testa RNA virus såsom HCV-virus. PCR är en trestegsprocess, upprepad cykliskt: denaturering, primerglödgning, DNA-syntes (polymerisation). Den syntetiserade mängden DNA identifieras genom ELISA eller genom elektrofores.

PCR kan användas i olika biologiskt material - serum eller blodplasma, skrapning av urinröret, biopsi, pleuravätska, cerebrospinalvätska, etc. Den första PCR användes för diagnos av smittsamma sjukdomar såsom virushepatit B, virushepatit C, viral hepatit D, CMV-infektion, infektiös sexuellt överförbara infektioner (gonorré, trash diynaya, mykoplasma, ureaplasma infektion), tuberkulos, HIV -infektion, etc.

Fördelen med PCR vid diagnos av infektionssjukdomar över andra forskningsmetoder är följande:

• infektions orsaksmedlet finns i någon biologisk miljö i kroppen, inklusive materialet som erhållits genom biopsi;
• Det är möjligt att diagnostisera infektionssjukdomar i de tidigaste skeden av sjukdomen;
• En kvantitativ utvärdering av resultaten av forskningen är möjlig (hur många virus eller bakterier finns i det undersökta materialet);
• hög känslighet av metoden; t ex, är känsligheten hos PCR för detektion av DNA från hepatit B-virus i blodet 0,001 pg / ml (approximativt 4 x 10 ^två kopior / ml), under det att känsligheten hos en DNA-hybridisering metod med användning av grenade prober - 2,1 pg / ml (approximativt 7 × 10 ⁵ kopior / ml).

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8]