Polymeraskedjereaktion (PCR) vid diagnos av infektionssjukdomar

PCR är en av de DNA-diagnostiska metoderna som gör det möjligt att öka antalet kopior av den detekterade delen av genomet (DNA) hos bakterier eller virus miljontals gånger med hjälp av enzymet DNA-polymeras. Den testade delen av nukleinsyra specifik för ett givet genom multipliceras (amplifieras) många gånger, vilket gör att den kan identifieras. Först delas DNA-molekylen hos bakterier eller virus i två kedjor genom uppvärmning, sedan binder de, i närvaro av syntetiserade DNA-primers (nukleotidsekvensen är specifik för det genom som ska bestämmas), till komplementära sektioner av DNA, och den andra kedjan av nukleinsyra syntetiseras efter varje primer i närvaro av termostabilt DNA-polymeras. Två DNA-molekyler erhålls. Processen upprepas många gånger. En DNA-molekyl, dvs. en bakterie- eller viruspartikel, räcker för diagnostik. Införandet av ett ytterligare steg i reaktionen - DNA-syntes på en RNA-molekyl med hjälp av enzymet omvänt transkriptas - gjorde det möjligt att testa RNA-virus, såsom HCV-viruset. PCR är en trestegsprocess som upprepas cykliskt: denaturering, primerglödgning, DNA-syntes (polymerisation). Den syntetiserade mängden DNA identifieras med ELISA eller elektrofores.

PCR kan använda olika biologiska material - blodserum eller plasma, uretraskrapning, biopsi, pleuravätska, cerebrospinalvätska, etc. PCR används främst för att diagnostisera infektionssjukdomar såsom viral hepatit B, viral hepatit C, viral hepatit D, CMV-infektion, sexuellt överförbara infektioner (gonorré, klamydia, mykoplasma, ureaplasmainfektioner), tuberkulos, HIV-infektion, etc.

Fördelen med PCR vid diagnostisering av infektionssjukdomar jämfört med andra forskningsmetoder är följande:

• det infektiösa agenset kan detekteras i vilken biologisk miljö som helst i kroppen, inklusive material som erhållits under en biopsi;
• det är möjligt att diagnostisera infektionssjukdomar i de tidigaste stadierna av sjukdomen;
• det är möjligt att kvantitativt utvärdera forskningsresultaten (hur många virus eller bakterier som finns i det studerade materialet);
• Metodens höga känslighet; till exempel är PCR:s känslighet för detektion av hepatit B-virus-DNA i blod 0,001 pg/ml (ungefär 4×10^ ² kopior/ml), medan känsligheten för DNA-hybridiseringsmetoden med grenade prober är 2,1 pg/ml (ungefär 7×10^ ⁵ kopior/ml).

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ]