Medicinsk expert av artikeln
Nya publikationer
PCR som ett sätt att diagnostisera genetiska sjukdomar
Senast recenserade: 23.04.2024
Allt iLive-innehåll är mediekontrollerat eller faktiskt kontrollerat för att säkerställa så mycket faktuell noggrannhet som möjligt.
Vi har strikta sourcing riktlinjer och endast länk till välrenommerade media webbplatser, akademiska forskningsinstitut och, när det är möjligt, medicinsk peer granskad studier. Observera att siffrorna inom parentes ([1], [2] etc.) är klickbara länkar till dessa studier.
Om du anser att något av vårt innehåll är felaktigt, omodernt eller på annat sätt tveksamt, välj det och tryck på Ctrl + Enter.
PCR är en ny prestation i molekylär genetik, som används för DNA-amplifiering och tillåter den specifika delen av DNA (det vill säga någon gen av intresse) att snabbt replikeras in vitro mer än 200 000 gånger. För att utföra reaktionen är det tillräckligt att ha DNA-materialet i en cell; mängden DNA amplifierad av PCR är så stor att detta DNA helt enkelt kan färgas (med användning av radioaktiva sonder efter elektrofores krävs ej). En förutsättning för utförande av PCR är kunskapen om nukleotidsekvensen för den amplifierade DNA-regionen för korrekt val av artificiellt syntetiserade primers.
Närvarande, är PCR en process som sker i ett enda rör och bestående av upprepade cykler av amplifiering (reproduktion, kopia) av specifika DNA-sekvenser för att erhålla ett tillräckligt stort antal kopior som kan identifieras genom elektrofores. En viktig komponent i reaktions - "primers" - syntetiska oligonukleotider som består av 20-30 baser av komplementära "platser" (områden) annealing (anslutning) till den identifierbara delen av mall-DNA.
PCR går automatiskt ut i en programmerbar termostat - termocykler (termocykler). Trestegscykeln, som resulterar i replikor av den identifierbara delen av mall-DNA, upprepas 30 till 50 gånger i enlighet med det förinställda programmet hos termisk cykler. I den första cykeln hybridiserar oligopramerna med det ursprungliga mall-DNA, och därefter (i efterföljande cykler) och med de nyligen syntetiserade DNA-molekylerna när de ackumuleras i reaktionsblandningen. I sistnämnda fall slutar syntesen av DNA inte på grund av en förändring i temperaturregimen, men efter att ha nått DNA-polymerasgränsen för den amplifierade regionen, vilken bestämmer storleken av den nyligen syntetiserade DNA-regionen till inom en nukleotid.
Som ett sätt att detektera de erhållna DNA-molekylerna användes elektrofores, medelst vilken det amplifierade materialet är uppdelat i enlighet med storleken av amplikoner (amplifieringsprodukter).
Med hjälp av PCR är det möjligt att direkt undersöka lokaliseringsplatserna för misstänkta mutationer eller polymorfa platser samt att studera närvaron av andra specifika egenskaper hos DNA.
[