Medicinsk expert av artikeln
Nya publikationer
PCR som metod för att diagnostisera genetiska sjukdomar
Senast recenserade: 04.07.2025
Allt iLive-innehåll är mediekontrollerat eller faktiskt kontrollerat för att säkerställa så mycket faktuell noggrannhet som möjligt.
Vi har strikta sourcing riktlinjer och endast länk till välrenommerade media webbplatser, akademiska forskningsinstitut och, när det är möjligt, medicinsk peer granskad studier. Observera att siffrorna inom parentes ([1], [2] etc.) är klickbara länkar till dessa studier.
Om du anser att något av vårt innehåll är felaktigt, omodernt eller på annat sätt tveksamt, välj det och tryck på Ctrl + Enter.
PCR är en ny landvinning inom molekylärgenetik, som används för DNA-amplifiering och möjliggör snabb in vitro- multiplikation av en specifik DNA-region (dvs. vilken gen som helst av intresse) mer än 200 000 gånger. För att utföra reaktionen räcker det att ha DNA-material från en cell; mängden DNA som amplifierats med PCR är så stor att detta DNA enkelt kan färgas (användning av radioaktiva prober efter elektrofores krävs inte). En förutsättning för att utföra PCR är kunskap om nukleotidsekvensen för den amplifierade DNA-regionen för korrekt val av artificiellt syntetiserade primers.
För närvarande är PCR en enkelrörsprocess som består av upprepade amplifieringscykler (reproduktion, kopiering) av en specifik DNA-molekylsekvens för att erhålla ett tillräckligt stort antal kopior som kan identifieras med elektrofores. En av nyckelkomponenterna i reaktionen är "primers" - syntetiska oligonukleotider som består av 20-30 baser komplementära till "ställena" (områdena) för annealing (fästning) på det identifierade området av matrix-DNA:t.
PCR sker automatiskt i en programmerbar termostat - en termisk cykler (amplifierare). Trestegscykeln, som resulterar i exakta kopior av den identifierade sektionen av matrix-DNA, upprepas 30-50 gånger i enlighet med det specificerade termiska cyklerprogrammet. I den första cykeln hybridiserar oligoprimers med det ursprungliga matrix-DNA:t, och sedan (i efterföljande cykler) med nysyntetiserade DNA-molekyler allt eftersom de ackumuleras i reaktionsblandningen. I det senare fallet avslutas DNA-syntesen inte som ett resultat av en temperaturförändring, utan när DNA-polymerasgränsen för den amplifierade sektionen nås, vilket bestämmer storleken på den nysyntetiserade DNA-sektionen med en noggrannhet på en nukleotid.
Elektrofores används som en metod för att detektera de erhållna DNA-molekylerna, med hjälp av vilken det amplifierade materialet separeras i enlighet med amplikonernas (amplifieringsprodukternas) storlek.
PCR kan användas för att direkt undersöka platserna för misstänkta mutationer eller polymorfa platser, samt för att studera förekomsten av andra specifika DNA-funktioner.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]