Konfokal mikroskopi

Konfokalmikroskopi anses för närvarande vara en av de mest lovande metoderna för in vivo-hudavbildning, vilket är anledningen till att intresset för den är ovanligt stort bland både kliniker och representanter för forskningsinstitut.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Konfokalmikroskopifunktioner

Inom dermatologi används konfokal lasermikroskopi för:

• studie av föreningars penetration i huden (penetrationsvägar, kinetik, distribution i huden);
• observation av körtlarnas funktion (bestämning av aktivt och passivt tillstånd);
• studier av mikrocirkulationsbädden (inklusive i realtid);
• diagnostik av neoplasmer.

Utan att diskutera fördelar och nackdelar med ovan nämnda typer av konfokalmikroskopi noterar vi att fluorescenslaserkonfokalmikroskopi har blivit alltmer populärt under senare år.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Konfokalmikroskopi för hudundersökning

Konfokalmikroskopet ger två ovärderliga möjligheter – studier av vävnader på cellnivå i ett tillstånd av fysiologisk vital aktivitet och demonstration av studiens resultat (dvs. cellaktivitet) i fyra dimensioner – höjd, bredd, djup och tid. För bildkvaliteten och studiens djup spelas den viktigaste rollen av vävnadens förmåga att släppa igenom ljus, med andra ord dess transparens. Konfokalmikroskopimetoden är kontaktlös, ljusstrålen orsakar ingen skada eller obehag för patienten som undersöks eller försöksdjuret.

Konfokal sveplasermikroskopi (CSLM) används för att undersöka huden. Metoden gör det möjligt att se epidermis och papillärskiktet i dermis med en upplösning nära histologisk. Alla undersökningsresultat visas på skärmen och sparas som ett paket med bildfiler (som mikrofilm (i dynamik) eller mikrofotografier).

Det finns två typer av metoden:

• reflekterande (reflektans CSLM) - baserat på det faktum att olika intracellulära och intercellulära strukturer har olika brytningsindex för ljus, vilket möjliggör erhållande av en kontrastbild.
• fluorescens (fluorescens CSLM) - använder laserljus som penetrerar huden och exciterar exo- eller endokromoforer i den, vilka som svar börjar avge fotoner (dvs. fluorescera).

Lateral upplösning är det minsta avståndet mellan punkter belägna på ett horisontellt plan, dvs. ett plan parallellt med hudytan. Axiell upplösning är det minsta avståndet mellan punkter belägna på ett plan vinkelrätt mot hudytan.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Konfokalmikroskopins historia

Idén att skapa ett mikroskop som kan visa ett snitt av levande vävnad på cellnivå utvecklades aktivt för 130 år sedan. Huvudelementet i moderna mikroskop designades i slutet av 1800-talet och var en roterande skiva med små hål arrangerade i en spiral. Denna skiva uppfanns 1883 av den tyska studenten Paul Nipkow, efter vilken den fick sitt namn - Nipkow-skivan (eller Nipkow-skivan). Uppfinningen baserades på ljusets förmåga, som passerar genom små hål i skivan och ett förstoringsglas, att tränga djupt in i vävnaden och belysa ett cellfragment på avstånd från ytan. När skivan roterar snabbt bildar fragmenten en enda bild. Genom att flytta strukturen bort från eller närmare objektet är det möjligt att variera djupet på den optiska sektionen av den studerade vävnaden.

Det var först med tillkomsten av videoinspelare på 1980-talet och datorer som kunde bearbeta bilder i början av 1990-talet som det blev möjligt att skapa och effektivt använda de moderna mikroskop som används idag.