Karyotypning

För studier av kromosomer används ofta kortsiktiga blodkulturer, såväl som benmärgsceller och fibroblastkulturer. Blodet som levereras till laboratoriet med antikoagulant utsätts för centrifugering för utfällning av röda blodkroppar, och leukocyter inkuberas i odlingsmediet i 2-3 dagar. Fytohemagglutinin sättes till blodprovet, eftersom det accelererar agglutinationen av erytrocyter och stimulerar uppdelningen av lymfocyter. Den lämpligaste fasen för studier av kromosomer är mitosens metafas, så colchicin används för att stoppa uppdelningen av lymfocyter vid detta skede. Att tillsätta detta läkemedel till kulturen leder till en ökning av andelen celler som befinner sig i metafas, det vill säga vid cellcykelns stadium, när kromosomerna ses bäst. Varje kromosomreplikat (producerar sin egen kopia) och efter lämplig färgning är synlig i form av två kromatider kopplade till centromerer eller central förträngning. Cellerna behandlas sedan med en hypotonisk natriumkloridlösning, fixerad och färgad.

För färgning av kromosomer används Romanovsky-Giemsa-färgämnet, 2% acetaminomin eller 2% acetazarin oftare. De plettar helt och hållet kromosomer, likformigt (rutinmetoden) och kan användas för att identifiera numeriska anomalier av mänskliga kromosomer.

För att erhålla en detaljerad bild av kromosomernas struktur, identifiering (identifiering) av individuella kromosomer eller deras segment används olika metoder för differentiell färgning. De vanligaste metoderna är Giemsa, G- och Q-böjning. En mikroskopisk undersökning av läkemedlet längs kromosomens längd avslöjar en serie färgade (heterochromatin) och omaintade (eukromatin) band. Karaktären av den tvärgående strimman som erhållits i detta fall möjliggör identifiering av varje kromosom i uppsättningen, eftersom randväxlingen och deras storlekar är strängt individuella och konstanta för varje par.

Metafasplattor av enskilda celler fotograferas. Individuella kromosomer skärs av fotografierna och klistras på pappersarket i ordning; En sådan bild av kromosomer kallas en karyotyp.

Användningen av ytterligare färgning, liksom nya metoder för att erhålla kromosompreparat, som tillåter att sträcka kromosomerna i längd, ökar signifikantheten av cytogenetisk diagnostik.

En särskild nomenklatur har utvecklats för att beskriva den mänskliga karyotypen. Den normala karyotypen hos en man och en kvinna betecknas som 46, XY respektive 46, XX. I Downs syndrom, som kännetecknas av närvaron av en ytterligare kromosom 21 (trisomi 21), beskrivs kvinnors karyotyp som 47, XX 21+ och män - 47, XY, 21+. I närvaro av en strukturell anomali av kromosomen är det nödvändigt att ange en ändrad lång eller kort arm: bokstaven p betecknar en kort arm, q en lång arm och t en translokation. Således, när den korta armen av kromosom 5 ("kattskrimsyndromet") raderas, beskrivs kvinnkaryotypen som 46, XX, 5p-. Moderen till ett barn med translokations Downs syndrom - en bärare med en balanserad translokation av 14/21 har en karyotyp av 45, XX, t (14q, 21q). Översättningskromosomen bildas när de långa armarna av kromosom 14 och 21 sammanfogar, korta axlar försvinner.

Varje axel är uppdelad i distrikt, och i sin tur - i segment, och de och andra betecknas med arabiska siffror. Kromosomens centromer är utgångspunkten för räkning av regioner och segment.

Således för topografin kromosomer med fyra taggar: kromosom nummer skulderteckenområdet nummer och segmentnumret inom ett givet område. Till exempel 6p21.3 rekord innebär att vi talar om den 6: e kromosomparet, dess korta arm, område 21, segment 3. Det finns flera valfria tecken, särskilt PTER - i slutet av den korta armen, qter - i slutet av den långa armen.

Den cytogenetiska forskningsmetoden tillåter att upptäcka borttagningar och andra förändringar i kromosomer endast i storleken av cirka 1 miljon baser (nukleotider).

[1], [2], [3], [4]