Karyotypering

Korttidsblododlingar, benmärgsceller och fibroblastkulturer används oftast för att studera kromosomer. Blod med antikoagulantia som levereras till laboratoriet centrifugeras för att sedimentera erytrocyterna, och leukocyterna inkuberas i ett odlingsmedium i 2-3 dagar. Fytohemagglutinin tillsätts blodprovet, eftersom det accelererar agglutinationen av erytrocyter och stimulerar lymfocytdelning. Den mest lämpliga fasen för att studera kromosomer är mitosens metafas, så kolchicin används för att stoppa lymfocytdelningen i detta skede. Tillsats av detta läkemedel till kulturen leder till en ökning av andelen celler i metafas, det vill säga i det skede av cellcykeln då kromosomerna är mest synliga. Varje kromosom replikerar (producerar sin egen kopia) och är efter lämplig färgning synlig som två kromatider fästa vid centromeren, eller den centrala sammandragningen. Cellerna behandlas sedan med en hypoton natriumkloridlösning, fixeras och färgas.

För färgning av kromosomer används oftast Romanovsky-Giemsa-färgämne, 2 % acetarmin eller 2 % acetarsein. De färgar kromosomerna helt och jämnt (rutinmetod) och kan användas för att upptäcka numeriska avvikelser hos mänskliga kromosomer.

För att få en detaljerad bild av kromosomstrukturen, identifiera (definiera) enskilda kromosomer eller deras segment, används olika metoder för differentiell färgning. De vanligaste metoderna är Giemsa, såväl som G- och Q-banding. Vid undersökning av preparationsmikroskopi längs kromosomens längd avslöjas ett antal färgade (heterokromatin) och ofärgade (eukromatin) band. Beskaffenheten hos den tvärgående strimman som erhålls på detta sätt gör det möjligt att identifiera varje kromosom i uppsättningen, eftersom växlingen av band och deras storlekar är strikt individuella och konstanta för varje par.

Metafasplattorna i enskilda celler fotograferas. Enskilda kromosomer skärs ut från fotografierna och klistras i ordning på ett pappersark; denna bild av kromosomer kallas en karyotyp.

Användningen av ytterligare färgning, liksom nya metoder för att erhålla kromosompreparat som gör att kromosomer kan sträckas i längd, ökar avsevärt noggrannheten i cytogenetisk diagnostik.

En särskild nomenklatur har utvecklats för att beskriva den mänskliga karyotypen. Den normala karyotypen för en man och en kvinna betecknas som 46, XY respektive 46, XX. Vid Downs syndrom, som kännetecknas av närvaron av en ytterligare kromosom 21 (trisomi 21), beskrivs kvinnans karyotyp som 47, XX 21+ och mannens 47, XY, 21+. Vid en strukturell anomali på kromosomen är det nödvändigt att ange den förändrade långa eller korta armen: bokstaven p betecknar den korta armen, q betecknar den långa armen och t betecknar translokationen. Således, vid deletion av den korta armen på kromosom 5 (cri du chat-syndromet), beskrivs den kvinnliga karyotypen som 46, XX, 5p-. Modern till ett barn med translokation Downs syndrom, bärare av den balanserade translokationen 14/21, har en karyotyp på 45, XX, t(14q; 21q). Translokationskromosomen bildas genom sammansmältning av de långa armarna i kromosom 14 och 21, och de korta armarna går förlorade.

Varje arm är indelad i regioner, som i sin tur är indelade i segment, vilka båda betecknas med arabiska siffror. Kromosomens centromer är utgångspunkten för att räkna regioner och segment.

Således används fyra etiketter för kromosomtopografi: kromosomnummer, armsymbol, regionnummer och segmentnummer inom regionen. Till exempel betyder posten 6p21.3 att vi talar om kromosom 6 i det sjätte paret, dess korta arm, region 21, segment 3. Det finns också ytterligare symboler, särskilt pter - änden av den korta armen, qter - änden av den långa armen.

Den cytogenetiska forskningsmetoden möjliggör detektion av deletioner och andra förändringar i kromosomer endast med en storlek på cirka 1 miljon baser (nukleotider).

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]