Diagnos av herpes

Diagnos av herpes baseras på genomförandet av den klassiska virusutsöndring i känsliga cellkulturer, immunofluorescens och serologiska metoder, som utför colposcopic studier med hjälp av moderna molekylärbiologiska metoder (PCR, dot-hybridisering), vilket gör det möjligt att diagnostisera alla herpesvirusgruppen, inklusive HHV-6 och HHV-7 typer.

Metoder för laboratoriediagnos av herpesinfektion

De huvudsakliga metoderna syftade till att utsöndra HSV eller upptäcka virala partiklar och / eller deras komponenter	Hjälpmetoder som syftar till att detektera antikroppar mot HSV i biologiska vätskor i människokroppen
Isolering av HSV i känsliga kulturer av celler och djur Direkt och immunelektronmikroskopi Direkta och indirekta MFA-alternativ IFA Molekylära biologiska metoder Latexagglutinationsreaktion	Neutraliseringsreaktion RSK Bestämning av antikroppar mot icke-strukturella proteiner av HSV-1,2

Det är visat att 76% av patienterna har genital herpes (GH) orsakad av HSV-2 och i 24% - HSV-1-typ. Och GG som monoinfektion uppkom endast hos 22% av patienterna, i 78% av fallen upptäcktes mikrobiella föreningar. Hos 46% av patienterna upptäcktes parasitocenos orsakad av två patogener, inklusive klamydia detekterades i 40% av fallen. Mindre ofta i smutsarna bestämde gardnerelly, Trichomonas, gonokocker.

Hos 27% av patienterna representerades parasitocenos av tre och 5,2% av fyra patogener. Och oftare fanns en kombination av chlamydia med Gardnerella och Candida svampar. Dessa data motivera behovet av en noggrann bakteriologisk undersökning av patienter YY att identifiera de patogena medelskombinationer, såväl som i fördjupad studie av patogenesen av blandade infektioner i det urogenitala området, vilket skulle göra det möjligt för en differentierad komplex terapi av HSV-infektion.

Material som ska studeras vid isolering av HSV beroende på lokalisering av herpetic lesioner

Lokalisering av lesioner	Innehåll av blåsor	Cellskrapning				SMZ	Aspirera från bronkierna	Biopsiprov	Blod
		1	2	3	4
Läder	+								+
ögon			+						+
Genitalia				+					+
Anus	+				+				+
Mun	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Lungor		+					+		+
Levern								+	+
Medfödd herpes	+	+	+				+		+

Metoder för laboratoriediagnos av cytomegalovirusinfektion

Metoder	Tid krävs för att få resultat	Anteckningar
Virologiska
Elektronmikroskopi	3 timmar	Malodostupen
Isolering av viruset i cellodling (CPD)	4-20 dagar	Standard, Slow
Immunfluorescerande färgning av tidig AH med monoklonala antikroppar	6 timmar	Mindre specifik
TSITOLOGICHESKIY	2-3 timmar	Mindre specifik
SEROLOGICHESKIY
RSK	2 dagar	Standard
Ssubsistence	1 dag	Tidsödande
RIF	6 timmar	Enkel, specifik
NRIF	6 timmar	Komplex
RIMF	6 timmar	Komplex
IFA (IgM, TO)	6 timmar	Snabbt, enkelt
Immunoblot	6 timmar	Dyra
Molekylärbiologiska
MG	5-7 dagar	Kostsamt, tidskrävande
PCR	3 timmar	Dyra

Metoder för att diagnostisera herpes zosterviruset

Diagnostiska metoder	laboratoriemetoder
INDIREKT
Fördelning	Tygkultur, kycklingembryon, laboratoriedjur, samodling med permissiva celler eller hjälparvirus
Identifiering av isolat	Neutraliseringsreaktion, DSC, IF, IPPE, reaktion av fällningsisoler, agglutination, IF
RAK
Cytologi	Smuts: färgimmunofluorescens
Histologi	Patomorfologi hos cellen
Struktur	Embryonmikroskopi, immunoelektronisk mikroskopi
Bestämning av antigener	IF, PIÉF, RIM, IFA
Bestämning av lokal produktion av antikroppar	Ig M, Ig G, Ig A: IFA, RIA
Molecular Biological Approaches	Molekylär hybridisering, PCR

Laboratoriediagnostik av infektion orsakad av herpes zostervirus

Diagnostiska problem	Metoder	Förväntat resultat
Akut primär infektion	1	Detektion efter 2 timmar
	2	Nivåerna av antikroppar växer långsamt
	3	Förekomma 3 dagar efter infektion
Akut reaktiverad infektion	1	Detektion av ULV på 2 timmar
	2	Nivåerna av antikroppar växer långsamt
	4	Förekommer 4 dagar efter utslag av utslag

1. bestämningen i vätskan av vesiklar av WIEF;
2. serologi: DSC, ELISA, som syftar till att identifiera
3. Serologi: ELISA, som syftar till att detektera IgM;
4. serologi: ELISA, som syftar till att detektera IgA, IgM.

Metoder för att indikera immunsvaret hos en infektion på grund av herpes zosterviruset

Tillvägagångssätt	Metod
Detektion av ökad antikroppstiter i den andra sera	RSK, RTGA, RPGA, neutraliseringsreaktion IF, RIM, ELISA
Detektion av Ig G, Ig En klassspecifik antikroppar i det första serumprovet	IFA, IF, RIM, latexagglutination

Tolkning av resultat av serologisk undersökning av patientsera på herpesvirusinfektioner (ELISA)

Namn på infektion / markör	Genomsnittliga trösklar för infektioner
	Analysresultat	Tolkning
Cytomegali Anti-CMV IgG (1-20 E / ml) Anti-CMV IgM (100-300%)	Positiv 1-6 Positiv 6-10 Positiv> 10 Negativ Positiv 100-300 Negativ <90 Tvivelaktig 90-100	Remission Förstärkning av sjukdomen Akut fas av sjukdomen Ingen infektion (sjukdom) Akut fas av sjukdomen Upprepa analysen efter 2-3 veckor
Herpes enkla 1,2 serotyper Anti-HSV 1/2 totalt. (100-900%)	Positiv 100-400 Positiv 400-800 Positiv> 800 Negativ <100	Remission Förstärkning av sjukdomen Akut fas av sjukdomen Ingen infektion (sjukdom)

I tabellen presenteras de huvudsakliga metoderna för laboratoriediagnostik av herpesvirusinfektioner och rekommenderar även biologiska material som undersöks för isolering av HSV, med hänsyn till lokalisering av herpetic lesioner

Tillförlitligt är fördelningen av herpes simplex och CMV genom infektion av känsliga cellkulturer. Vid virologisk undersökning av 26 patienter i återfallstiden isolerades HSV på en känslig Vero-cellkultur i 23 fall (88,4%). I infekterade kulturer observerades ett mönster av cytopatisk verkan av HSV-bildandet av multinucleaterade jätteceller eller ackumuleringen av rundade och förstorade celler i form av klaser. I 52,1% av fallen var det möjligt att detektera foci av den cytopatiska effekten av viruset 16-24 timmar efter infektion. Vid 48-72 timmar inkubation av infekterade kulturer ökade andelen material som orsakade specifik cellförstöring till 87%. Och endast i 13% av fallen detekterades positiva resultat 96 timmar efter infektion och mer eller med upprepad passage.

Metoder för laboratoriediagnos av generaliserad herpesinfektion

De huvudsakliga metoderna syftade till detektering (isolering) av herpesvirus, deras partiklar och deras komponenter	Hjälpmetoder som syftar till att detektera antikroppar mot herpesvirus i biologiska vätskor, detekterar enzymatiska skift i blodserum
Isolering av Herpes-virus på mottagliga cellkulturer och djur Direkt och immun elektronmikroskopi Direkt och indirekt immunoperoxidas metod utföringsformerna Direkta och alternativ indirekta fluorescerande antikroppsteknik alternativ ELISA Utföringsformer av molekylärt (DNA-DNA) hybridiserande polymeraskedjereaktion Reaction latexagglutination	Neutralisering reaktionskomplementbindningsreaktion latexagglutination Indirekt fluorescerande antikroppsmetod utförande Indirekt immunoperoxidas förfarandevariant Utföringsformer ELISA Metod immunblotting radiell fixering av komplement Metod Bestämning av alanin och aspartat nivåer

För att diagnostisera infektiös mononukleos (infektion orsakad av VEB) används serologiska metoder. Reaktionen av Paul Bunnel med erytrocyter av en ram, en diagnostisk titer på 1:28 och högre med en enda studie av serum, eller en 4-faldig ökning av antikroppar vid undersökning av parasera. Använd Goff-Bauer-reaktionen med en suspension av hästens 4% formaliserade röda blodkroppar. Resultatet beaktas efter 2 minuter, med infektiös mononukleos är reaktionen mycket specifik.

För närvarande utvecklas en enzymimmunanalys (ELISA) för att diagnostisera infektiös mononukleos. I detta fall bestäms IgG- och IgM-antikroppar i patientens serum genom att inkubera det med lymfoblaster infekterade med EBV, följt av behandling med fluorescerande antikroppar. Under den akuta perioden av sjukdomen bestäms antikroppar mot viruskapsidantigenet i en titer av 1: 160 och däröver.

När man använder ett antal importerade kommersiella testsystem i IFA kan identifiera: antikroppar mot ant Egan EBV höljesantikroppar till tidig antigen av EBV, den totala antikroppen till en tidig antigen av EBV, bestämd i den akuta fasen av sjukdomen och i kärnan och i cytoplasman, och den begränsade antikroppen EBV tidigt, bestämd i den akuta fasen av sjukdomen och i kärnan och i cytoplasman hos celler, som avgränsas antikroppar mot EBV-tidiga antigen, bestämda i mitt av sjukdomen endast i cytoplasman hos celler, och antikroppar mot EBV nukleär antigen. Med användning av dessa testsystem möjliggör den differentiella diagnosen av ett antal sjukdomar associerade med EBV.

Efter positiv ELISA för att identifiera de antikroppar EBV ger immunoblot bekräftar respons, som detekterar närvaron av antikroppar för att åtskilja EBV-markörproteiner (p-proteiner): P23, P54, p72 (närvaron av proteinet antyder möjligheten att reproduktionen EBV), s 138. Said ovan med användning av laboratoriemetoder för att övervaka effektiviteten av behandlingen.

Känsligheten hos de virologiska metoderna är 85-100%, specificiteten är 100%, studietiden är 2-5 dagar. Ofta i praktiken av metoden för direkt immunfluorescens (PIF) med polyklonala eller monoklonala antikroppar mot HSV-1 och HSV-2. UIF-metoden kan enkelt reproduceras i ett konventionellt kliniskt laboratorium, det är inte dyrt, känsligheten är över 80%, specificiteten är 90-95%. Genom immunofluorescerande mikroskopi avslöjade närvaron av cytoplasmatiska inklusioner, morfologiska särdrag, andelen infekterade celler i utstryk, skrapar uretral, cervikalkanalen, cervix, rektum.

UIF-metoden ger en uppfattning om de morfologiska egenskaperna hos celler och förändringar i lokaliseringen av HSV-antigener. Förutom direkta tecken på cellskada genom herpesvirus (detektion av specifik luminescens) finns det indirekta tecken på herpesinfektion enligt UIF-data:

• aggregering av kärnämnen, exfoliering av karyolma;
• närvaro av den så kallade. Kärnor "hål", när endast en karyolemma förblir från cellens kärna;
• Förekomsten av intranukleära ingrepp - Caudrys kalv.

Vid inställning a-kassan läkaren får inte bara kvalitet, men också en kvantitativ bedömning av de infekterade cellerna som vi har använts för att utvärdera effektiviteten av antiviral terapi med aciklovir (AC). Således undersöktes 80 patienter med enkla genitalherpes (GG) genom UIF-metoden i dynamik. Det visas, att om, före behandling med acyklovir i utstryk 88% av patienterna hade en hög procentandel av infekterade celler (50-75% och högre), efter en kurs av acyclovir i utstryk 44% av patienter med friska celler som detekteras i 31% av fallen är markerade individuella infekterade celler och 25% av patienterna hade upp till 10% av de infekterade cellerna.

Innehållet hos smittade celler i utpressningar (PIF-reaktion) hos patienter med genital herpes behandlade med acyklovir

Sjukdomstider	Procentandel i utpressningar
	Infekterade celler					Normala celler
	Mer än 75%	50-75%	40-50%	10%	Enstaka celler i n / sp
Återfall (före behandling)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remission (efter behandling)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Med hjälp av många år av UIF och metoden för dot-hybridisering sammanföll nästan 100% av fallen med resultaten av studien. Det bör noteras att för att öka tillförlitligheten i diagnosen GH, särskilt i fall där det finns subklinisk och malomanifestnyh former av herpes, är det rekommenderat att använda 2-3 metod laboratoriediagnos, speciellt när man undersöker gravida kvinnor, kvinnor med obstetrisk historia missgynnade personer med ospecificerad gynekologisk diagnos.

Sålunda, för PCR diagnos av virala och bakteriella infektioner i det urogenitala området är nödvändigt att utvärdera de positiva resultat som erhölls med historia, närvaron (eller frånvaron) av specifika kliniska symptom. Om chlamydia detekteras med PCR, är det i detta fall möjligt att prata om infektion och lösa behandlingsproblemen i enlighet med detta. I fall av detektering av mykoplasma (ureaplasmas) är opportunistiska patogener, för att bekräfta diagnosen är skyldig att genomföra kultur ytterligare studier, t. E. Crop material från en patient känslig för cellkulturer. Först när positiva resultat erhålls i kulturanalysen kan vi tala om laboratoriebekräftelse av diagnosen mycoplasmosis. Samma metod kommer att möjliggöra, om det är nödvändigt, att bestämma känsligheten hos de isolerade mykoplasma för ofta använda medicinska former (antibiotika, fluorokinoloner, etc.).

Kanske en enstegsinfektion med flera virus av familjen Nepresviridae. Ofta upptäckte vi infektion hos en patient med HSV-1, HSV-2 och CMV-virus. Många gånger infekterade med flera herpesvirus var patienter med kliniska och laboratorieexponeringar av sekundär IDS (patienter med onkohematologiska, onkologiska, HIV-infekterade). Således är det visat att kliniska och immunologiska störningar som utvecklas vid HIV-infektion åtföljs av en ökning av antalet herpesvirus som detekteras genom molekylär hybridiseringsmetod. I detta prognostiskt mest signifikanta kan betraktas som en komplex enstegsdetektering av DNA av HSV-1, CMV och HHV-6-typ.

[1], [2], [3]