Immunofenotypning av hemoblastoser

Betydande framsteg i hematologiska studier förknippade under de senaste åren med hjälp av moderna immunologiska metoder och automatiserade verktyg för att analysera och sortera celler av perifert blod och benmärg - flödescytometrar. Traditionella morfologiska och cytokemiska studier av substratet cellsjukdom (blod, röd benmärg, lymfkörtlar, mjälte, etc.), i många fall, särskilt i lymfoproliferativa sjukdomar, avslöjar inte hela olika alternativ bland morfologiskt liknande former och identifiera ursprunget för den patologiska klonen . Dessa problem kan lösas endast genom att studera cellernas immunologiska egenskaper. Varje steg i differentieringen av hematopoetiska celler har sin egen uppsättning av antigener som finns på den internationella klassificeringen kallas differentiering och differentiering är uppdelade i grupper, som betecknas CD.

Vid block differentiering av neoplastiska förändringar kan inträffa när som helst under normal cellutveckling, vilket resulterar i en patologisk cellklon som definierar substrat sjukdom och som har samma immunologiska (eller fenotypiskt) karakteristik. Efter en studie av dessa markörer i celler kan bestämmas med någon form eller utföringsform av sjukdomen är konsekventa, dvs på basis av immunologiska cellfenotyp differentiell diagnos, som är den svåraste i lymfoproliferativa störningar, eftersom de huvudcell substrat patologiska sjukdomar är nästan samma typ av celler morfologiskt.

Fenotypning möjliggör typing av blast och mogna blodceller i myelo-, mono- och lymfocyt-serien med användning av monoklonala antikroppar genom närvaron av differentierande antigener (receptorer) i cellväggen. I avsnittet "Utvärdering av organismens immunstatus" beskrivs delarna av cellmarkörernas egenskaper och diagnostiska signifikans; Nedan följer en kort beskrivning av antigena cellmarkörer applicerade på diagnosen hemoblastos. På membran av blodceller och röd benmärg kan följande antigener (markörer) identifieras.

• CD2 är ett monomeriskt transmembran glykoprotein. Det är närvarande på ytan av alla cirkulerande T-lymfocyter och vissa NK-lymfocyter. CD2 deltar i processen med alternativ aktivering av T-lymfocyter. Detektion av CD2 med användning av monoklonala antikroppar i klinisk praxis används för fenotypning av akuta T-cellleukemier, lymfom, kroniska inflammatoriska och immunbristande tillstånd.
• CD3 - ett proteinkomplex associerat med en antigen-specifik T-cellreceptor är den huvudsakliga funktionella markören för T-lymfocyter. Det underlättar överföringen av aktiveringssignalen från membranet till cellens cytoplasma. Bestämning av CD3 indikerade för diagnos av akut T-cell leukemi, lymfom (CD3 inte uttrycks i icke-T-cell-lymfoida neoplasmer) och immunbristsjukdomar.
• CD4 är ett transmembran glykoprotein uttryckt av en subpopulation av T-hjälpare (inducerare) som utgör 45% av perifera blodlymfocyter. I de tidiga stadierna av lymfocytutveckling i tymus, CD4-antigener, liksom CD8, uttrycks av alla kortikala lymfocyter. Medullära tymocyter, vars fenotyp liknar mogna CD4 + T-celler i perifert blod (T-hjälpare), uttrycker redan antingen CD4- eller CD8-receptorer. I perifert blod märks upp till 5% av cellerna samtidigt CD4 och CD8. Lite uttryck av CD4 är möjligt på vissa monocytceller. CD4 uttrycks i de flesta fall, T-cell-lymfom, inklusive mycosis fungoides, och i HTLV-associerade T-celleukemi (HTLV - HTLV - HTLV).
• CD5 - ett enkelkedjigt glykoprotein, som är närvarande på alla mogna T-lymfocyter och de flesta tymocyter, uttrycks svagt med B-lymfocyter. CD5 detekteras på neoplastiska celler av B-cell kronisk lymfocytisk leukemi och centro-cytiskt lymfom. I andra typer av maligna lymfoida sjukdomar - follikellymfom, hårig cellleukemi, storcellslymfom - CD5 uttrycks inte.
• CD7 är ett enkelsträngat protein, den tidigaste markören för T-celldifferentiering. Den uttrycks av pro-T-lymfocyter även innan de migrerar till thymus. CD7 detekteras på de flesta NK-celler, svagt uttryck noteras på monocyter. B-lymfocyter och granulocyter innehåller inte detta antigen. Definitionen av CD7 används för diagnos av lymfom, barns T-celllymfoblastisk leukemi.
• CD8 är ett protein bestående av två polypeptidkedjor kopplade av disulfidbroar. Den uttrycks av en subpopulation av cytotoxiska och suppressor-T-lymfocyter, vilka innefattar 20-35% perifera blodlymfocyter. Detta antigen har också NK-lymfocyter, kortikala tymocyter, 30% av medulära tymocyter och en subpopulation av röda benmärgsceller. CD8 undersöks för kvantitativ utvärdering av T-suppressorinnehållet (se avsnittet "T-lymfocyter-suppressorer i blodet" ovan).

• CD10 är endopeptidas associerat med cellmembranet. CD10 uttrycker unga former av B-lymfocyter och en subpopulation av kortikala lymfocyter. CD10 uttrycker alla celler av ALL.
• CD11c-uttrycka makrofager, monocyter, granulocyter, NK-celler och håriga cellleukemiceller på cellmembranet.
• CD13 - glykoprotein som uttrycks av celler av myelomonocytisk serien (stamfaderceller, neutrofiler, basofiler, eosinofiler, monocyter och celler av myeloid leukemi). Det är frånvarande i T- och B-lymfocyter, erytrocyter och blodplättar.
• CD14 är ett ytmembran glykoprotein. Den uttrycks huvudsakligen av monocyter och makrofager. CD14 detekteras i mer än 95% monocyter av perifert blod och benmärg. Starkt uttryck av CD14 observeras vid akut myeloblastisk leukemi. Vid akut och kronisk lymfoblastisk leukemi uttrycks inte detta antigen.
• CD15 är en oligosackarid. Han deltar i processer av fagocytos och kemotaxis. Detta antigen är närvarande på ytan av mogna granulocyter och Berezovsky-Sternberg-celler. CD15-antigenuttryck detekteras i Hodgkins sjukdom. I icke-Hodgkins lymfom upptäcks CD15 inte i de flesta fall.
• CD16 uttrycks på ytan av granulocyter, monocyter, makrofager och NK-celler. Alla lymfocyter som uttrycker detta antigen har förmågan för antikroppsberoende cellulär cytotoxicitet. CD16 bestäms när man skriver kroniska myelocytiska leukemier för att karakterisera NK-celler.
• CD19 är ett glykoprotein närvarande på alla perifera B-lymfocyter, liksom på alla B-cellprekursorer. Det är frånvarande på plasmaceller. Detta är den tidigaste markören för B-celler, spelar en viktig roll vid reglering av aktivering och proliferation av B-lymfocyter. CD19 uttrycks på alla neoplastiska celler av akut leukemi av B-cell-ursprung och är också närvarande i vissa former av akut monoblast leukemi.
• CD20 är ett icke-glykosylerat protein. I ontogenesen av B-lymfocyter uppträder CD20-antigenet efter CD19 vid scenen av pre-B-celldifferentiering av lymfocyter. Det är frånvarande på plasmamembranet av plasmaceller. Uttryckt i ALL, kronisk lymfatisk leukemi, hårcellsleukemi, Burkitts lymfom, och mycket sällan - akut leukemi monoblastny.
• CD21 är ett glykoprotein, i en signifikant mängd närvarande på B-lymfocyter i lymfoidorgan och i en liten mängd på B-celler i perifert blod. CD21 är en receptor för Epstein-Barr-viruset.
• CD22 är ett protein bestående av två polypeptidkedjor. Det uttrycks på membranet hos de flesta B-lymfocyter, inklusive stamceller (prolymphocyter). Antigenet uttrycks inte på B-lymfocyter (plasmaceller) efter deras aktivering. Det mest uttalade uttrycket av CD22 detekteras på celler med hårig cellleukemi, svag - i myeloid leukemi och icke-T-cell ALL.
• CD23 är ett glykoprotein uttryckt av aktiverade B-lymfocyter av perifert blod i mycket större utsträckning. CD23 medierar IgE-beroende cytotoxicitet och fagocytos av makrofager och eosinofiler.
• CD25 är ett enkelkedjigt glykoprotein identifierat som en lågaffinitetsreceptor för IL-2. Denna receptor uttrycks på aktiverade T-lymfocyter och vid en lägre densitet på aktiverade B-celler. I det perifera blodet hos friska människor är antigenet närvarande i mer än 5% av lymfoidcellerna.
• CD29 är en fibronektinreceptor. Det är allmänt fördelat i vävnader, det uttrycks av leukocyter. CD29-detektion på perifera blodceller används för att typifiera en subpopulation av T-celler som har CD4 + CD29 + fenotypen, som kallas typ 2-hjälper (Th2). Dessa celler, genom produktion av lymfokiner, deltar i förverkligandet av det humorala immunsvaret.
• CD33 är ett transmembran glykoprotein. Det är närvarande på ytan av celler i myeloid och monocytisk serien. Det finns på ytan av monocyter och, i mindre utsträckning, granulocyter av perifert blod. Cirka 30% av röda benmärgsceller uttrycker CD33, inklusive myeloblaster, promyelocyter och myelocyter. Antigen är frånvarande på membran av pluripotenta stamceller. CD33 används för att karakterisera celler i myeloida leukemier. Leukemi celler av lymfoid och erythroid ursprung uttrycker inte CD33.
• CD34 är ett fosfoglykoprotein, uttryckt av hematopoietiska stamceller, inklusive monopotenta stamceller. Det mest uttalade uttrycket av Ar observeras i tidiga progenitorer; när cellerna mognar faller markörens uttryck. CD34 finns också på endotelceller. CD34 används för att karakterisera celler i akut myelogen och lymfoblastisk leukemi. Med kronisk lymfocytisk leukemi och lymfom detekteras inte CD34-antigenuttryck.

• CD41a uttrycks av blodplättar och megakaryocyter. Monoklonala antikroppar för CD41a-detektion används för att diagnostisera megakaryoblastisk leukemi. Med Glązmann trombastheni är uttrycket av detta antigen frånvarande eller undertryckt signifikant.
• CD42b är ett membran glykoprotein bestående av två polypeptidkedjor. Markören finns på ytan av blodplättar och megakaryocyter. I klinisk praxis används detektion av CD42b för att diagnostisera trombocytopati - Bernard-Soulier syndromet.
• CD45RA tillhör klassen av transmembran glykoproteiner. Detta är ett vanligt leukocytantigen. Det uttrycks på cellmembranet av B-lymfocyter, i mindre utsträckning T-lymfocyter och på mogna medullära tymocyter. Markören uttrycks inte av granulocyter.
• CD45RO är en isoform med låg molekylvikt av CD45RA - en vanlig leukocyt Ag. De finns på T-celler (minnet T-lymfocyter), subpopulationer av B-lymfocyter, monocyter och makrofager. Monoklonala antikroppar att interagera med de flesta CD45RO tymocyt subpopulation av vilande CD4 + och CD8 + T-lymfocyter och mogna aktiverade T-celler. Celler av myelomonocytiskt ursprung, granulocyter och monocyter bär också detta antigen. Det detekteras i centroblastiska och immunoblastiska lymfom.
• CD46-O-glykosylerad dimer. Det är allmänt fördelade i vävnader och uttryckas T- och B-lymfocyter, monocyter, granulocyter, NK-celler, blodplättar, endotelceller, fibroblaster, men är frånvarande på ytan av erytrocyter. CD46 ger vävnadsskydd från komplementverkan.
• CD61 är en blodplättantigen. Det uttrycks på blodplättar av perifert blod och röd benmärg, liksom på megakaryocyter och megakaryoblaster. Dess definition används som en markör för akut megakaryoblastisk leukemi. Uttryck av antigen är frånvarande eller undertryckt hos patienter med Glanzmann trombasteni.
• CD95, även kallad Fas eller APO-1, är ett transmembran glykoprotein, en medlem av familjen av receptorer av tumörnekrosfaktor. Den uttrycks i signifikanta mängder på T-lymfocyter i perifert blod (CD4 + och CD8 +) och, i mindre utsträckning, på B-lymfocyter och NK-celler. Detta antigen uttrycks också på granulocyter, monocyter, vävnadsceller och neoplastiska celler. Bindning av CD95 till Fas-liganden (CD95L) inducerar apoptos i cellerna.
• CD95L eller Fas-ligand, ett membranprotein som tillhör familjen av receptorer av tumörnekrosfaktor. Detta antigen uttrycks av cytotoxiska T-lymfocyter, NK-celler och mycket ofta av tumörceller; den huvudsakliga induceraren av apoptos i celler.
• HLA-DR är en monomorf determinant av klass II-molekyler av det huvudsakliga humana histokompatibilitetskomplexet (HLA). Markören uttrycks på Langerhans-celler, dendritiska celler av lymfoidorgan, vissa typer av makrofager, B-lymfocyter, aktiverade T-celler och epitelceller från thymusen. Testet för denna markör används för att kvantifiera aktiverade T-lymfocyter med fenotypen CD3 + HLA-DR +.

Med ett annat urval av monoklonala antikroppar till markörer är det möjligt att göra ett fenotypiskt porträtt av celler som är karakteristiska för en given form av leukemi.

Förutom att använda immunfenotypning tekniker för diagnos och differentiell diagnos av hematologiska maligniteter, särskilt viktig vände deras användning vid behandlingsprocessen för att bedöma tillståndet i remission och kvarvarande populationen av leukemiceller. Veta fenotypiska "porträtt" av blastceller under perioden för diagnos, till dessa markörer kan hitta cell leukemiklon i remission, och från ökningen av deras antal - att förutsäga utvecklingen av återfall lång (för 1-4 månader) tills dess kliniska och morfologiska egenskaper.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]