Immunofenotypning av hemoblastoser

Betydande framsteg inom hematologisk forskning under senare år är förknippade med användningen av moderna immunologiska metoder och automatiserade metoder för analys och sortering av perifera blod- och benmärgsceller - flödescytometrar. Traditionella morfologiska och cytokemiska studier av sjukdomssubstratceller (blod, röd benmärg, lymfkörtlar, mjälte, etc.) tillåter oss i många fall, särskilt vid lymfoproliferativa sjukdomar, inte att identifiera hela mångfalden av varianter bland morfologiskt likartade former och fastställa ursprunget för den patologiska klonen. Dessa problem kan endast lösas genom att studera cellernas immunologiska egenskaper. Varje differentieringsstadium av hematopoetiska celler motsvarar sin egen uppsättning antigener, vilka enligt den internationella klassificeringen kallas differentiering och är indelade i differentieringskluster, betecknade CD.

Vid neoplastiska förändringar kan en differentieringsblockering uppstå i vilket skede som helst av normal cellutveckling, vilket resulterar i bildandet av en klon av patologiska celler som bestämmer sjukdomssubstratet och har samma immunologiska (eller fenotypiska) egenskaper. Genom att utföra studier av dessa markörer på celler är det möjligt att bestämma vilken form och variant av sjukdomen de motsvarar, det vill säga, baserat på cellernas immunologiska fenotyp, att utföra differentialdiagnostik, vilket är svårast vid lymfoproliferativa sjukdomar, eftersom huvudcellerna i sjukdomens patologiska substrat är morfologiskt nästan identiska celler.

Fenotypning möjliggör användning av monoklonala antikroppar för att typa blast- och mogna blodkroppar i myelo-, mono- och lymfocytserien genom närvaron av differentieringsantigener (receptorer) i cellväggen. Avsnittet "Bedömning av kroppens immunstatus" beskriver delvis egenskaperna och det diagnostiska värdet av studien av cellulära markörer; nedan följer en kort beskrivning av cellernas antigenmarkörer i relation till diagnosen hemoblastoser. Följande antigener (markörer) kan detekteras på membranen i blodkroppar och röd benmärg.

• CD2 är ett monomeriskt transmembranglykoprotein. Det finns på ytan av alla T-lymfocyter som cirkulerar i blodet och på vissa NK-lymfocyter. CD2 är involverat i processen för alternativ aktivering av T-lymfocyter. Detektion av CD2 med hjälp av monoklonala antikroppar används i klinisk praxis för fenotypning av akut T-cellsleukemi, lymfom, kroniska inflammatoriska tillstånd och immunbristtillstånd.
• CD3 är ett proteinkomplex associerat med den antigenspecifika T-cellsreceptorn och är den huvudsakliga funktionella markören för T-lymfocyter. Det underlättar överföringen av aktiveringssignalen från membranet till cellcytoplasman. Bestämning av CD3 är indicerat för diagnos av akut T-cellsleukemi, lymfom (CD3 uttrycks inte i icke-T-cells lymfoida neoplasmer) och immunbristsjukdomar.
• CD4 är ett transmembrant glykoprotein som uttrycks av en subpopulation av T-hjälpare (inducerare), vilka utgör 45 % av perifera blodlymfocyter. I de tidiga stadierna av lymfocytutvecklingen i tymus uttrycks CD4-antigener, såväl som CD8, av alla kortikala lymfocyter. Medullära tymocyter, vars fenotyp liknar mogna CD4+ T-celler i perifert blod (T-hjälpare), uttrycker redan antingen CD4- eller CD8-receptorer. I perifert blod bär upp till 5 % av cellerna både CD4- och CD8-markörer. Mindre uttryck av CD4 är möjligt på vissa celler i den monocytiska serien. CD4 uttrycks i de flesta fall av T-cellslymfom, inklusive mycosis fungoides, såväl som i HTLV-associerad T-cellsleukemi (HTLV - humant T-lymfotropiskt virus).
• CD5 är ett enkelkedjigt glykoprotein som finns på alla mogna T-lymfocyter och de flesta tymocyter, och uttrycks svagt av B-lymfocyter. CD5 detekteras på neoplastiska celler av kronisk lymfatisk leukemi hos B-celler och centrocytiskt lymfom. Vid andra typer av maligna lymfoida sjukdomar - follikulärt lymfom, hårcellsleukemi, storcelligt lymfom - uttrycks inte CD5.
• CD7 är ett enkelkedjigt protein, den tidigaste markören för T-cellsdifferentiering. Det uttrycks av pro-T-lymfocyter redan innan de migrerar till tymus. CD7 detekteras på de flesta NK-celler, svagt uttryck noteras på monocyter. B-lymfocyter och granulocyter innehåller inte detta antigen. CD7-bestämning används för att diagnostisera lymfom, T-cellslymfoblastisk leukemi hos barn.
• CD8 är ett protein som består av två polypeptidkedjor sammanlänkade av disulfidbryggor. Det uttrycks av en subpopulation av cytotoxiska och suppressor-T-lymfocyter, vilka utgör 20–35 % av perifera blodlymfocyter. Detta antigen uttrycks även av NK-lymfocyter, kortikala tymocyter, 30 % av medullära tymocyter och en subpopulation av röda benmärgsceller. CD8 studeras för att kvantifiera innehållet av T-suppressorer (se avsnittet "Suppressor-T-lymfocyter i blodet" ovan).

• CD10 är ett cellmembranassocierat endopeptidas. CD10 uttrycks av unga former av B-lymfocyter och en subpopulation av kortikala lymfocyter. CD10 uttrycks av alla ALL-celler.
• CD11c uttrycks på cellmembranet av makrofager, monocyter, granulocyter, NK-celler och hårcellsleukemiceller.
• CD13 är ett glykoprotein som uttrycks av celler i myelomonocytisk släktlinje (progenitorceller, neutrofiler, basofiler, eosinofiler, monocyter och myeloida leukemiceller). Det saknas i T- och B-lymfocyter, erytrocyter och trombocyter.
• CD14 är ett ytmembranglykoprotein. Det uttrycks huvudsakligen av monocyter och makrofager. CD14 detekteras på mer än 95 % av monocyterna i perifert blod och benmärg. Starkt uttryck av CD14 observeras vid akut myeloblastisk leukemi. Detta antigen uttrycks inte vid akut och kronisk lymfatisk leukemi.
• CD15 är en oligosackarid. Den är involverad i fagocytos och kemotaxi. Detta antigen finns på ytan av mogna granulocyter och Berezovsky-Sternberg-celler. Uttryck av CD15-antigenet detekteras vid Hodgkins sjukdom. Vid icke-Hodgkins lymfom detekteras inte CD15 i de flesta fall.
• CD16 uttrycks på ytan av granulocyter, monocyter, makrofager och NK-celler. Alla lymfocyter som uttrycker detta antigen har förmågan till antikroppsberoende cellulär cytotoxicitet. CD16 bestäms under typning av kroniska myelocytiska leukemier för att karakterisera NK-celler.
• CD19 är ett glykoprotein som finns på alla perifera B-lymfocyter och alla B-cellsprekursorer. Det saknas i plasmaceller. Det är den tidigaste markören för B-celler och spelar en viktig roll i regleringen av B-cellsaktivering och proliferation. CD19 uttrycks på alla neoplastiska celler vid akut leukemi av B-cellsursprung och förekommer även i vissa former av akut monoblastisk leukemi.
• CD20 är ett icke-glykosylerat protein. I ontogenesen av B-lymfocyter uppträder CD20-antigenet efter CD19 i stadiet av pre-B-cellsdifferentiering av lymfocyter. Det saknas i plasmamembranet hos plasmaceller. Det uttrycks i ALL, kronisk lymfatisk B-cellsleukemi, hårcellsleukemi, Burkitts lymfom och mycket sällan i akut monoblastisk leukemi.
• CD21 är ett glykoprotein som finns i betydande mängder på B-lymfocyter i lymfoida organ och i små mängder på B-celler i perifert blod. CD21 är en receptor för Epstein-Barr-viruset.
• CD22 är ett protein som består av två polypeptidkedjor. Det uttrycks på membranet hos de flesta B-lymfocyter, inklusive prekursorceller (prolymfocyter). Antigenet uttrycks inte på B-lymfocyter (plasmaceller) efter deras aktivering. Det mest uttalade uttrycket av CD22 detekteras på celler vid hårcellsleukemi, svagt vid myeloid leukemi och icke-T-cells ALL.
• CD23 är ett glykoprotein som uttrycks i mycket högre grad av aktiverade perifera blod-B-lymfocyter. CD23 medierar IgE-beroende cytotoxicitet och fagocytos av makrofager och eosinofiler.
• CD25 är ett enkelkedjigt glykoprotein som identifierats som en receptor med låg affinitet för IL-2. Denna receptor uttrycks på aktiverade T-lymfocyter och, i lägre densitet, på aktiverade B-celler. I perifert blod hos friska individer finns antigenet på mer än 5 % av lymfoida celler.
• CD29 är en fibronektinreceptor. Den är vitt distribuerad i vävnader och uttrycks av leukocyter. CD29-detektion på perifera blodkroppar används för att typa en subpopulation av T-celler med CD4+CD29+ fenotypen, vilka kallas typ 2-hjälpare (Th2). Dessa celler deltar i det humorala immunsvaret genom att producera lymfokiner.
• CD33 är ett transmembrant glykoprotein. Det finns på ytan av celler i den myeloida och monocytiska serien. Det finns på ytan av monocyter och, i mindre utsträckning, granulocyter i perifert blod. Cirka 30 % av röda benmärgsceller uttrycker CD33, inklusive myeloblaster, promyelocyter och myelocyter. Antigenet saknas i membranen hos pluripotenta stamceller. CD33-bestämning används för att karakterisera celler i leukemier av myeloid ursprung. Leukemiceller av lymfoid och erytroid ursprung uttrycker inte CD33.
• CD34 är ett fosfoglykoprotein som uttrycks av hematopoetiska progenitorceller, inklusive monopotenta stamceller. Det mest uttalade uttrycket av Ag observeras i tidiga progenitorceller; allt eftersom cellerna mognar minskar marköruttrycket. CD34 finns också på endotelceller. CD34-bestämning används för att karakterisera celler vid akuta myeloblastiska och lymfoblastiska leukemier. Vid kroniska lymfatiska leukemier och lymfom detekteras inte CD34-antigenuttryck.

• CD41a uttrycks av blodplättar och megakaryocyter. Monoklonala antikroppar för att detektera CD41a används för att diagnostisera megakaryoblastisk leukemi. Vid Glanzmanns trombasteni saknas eller är uttrycket av detta antigen signifikant undertryckt.
• CD42b är ett membranglykoprotein som består av två polypeptidkedjor. Markören detekteras på ytan av blodplättar och megakaryocyter. I klinisk praxis används detektion av CD42b för att diagnostisera trombocytopati - Bernard-Soulier syndrom.
• CD45RA tillhör klassen transmembrana glykoproteiner. Det är ett vanligt förekommande leukocytantigen. Det uttrycks på cellmembranet hos B-lymfocyter, i mindre utsträckning T-lymfocyter och på mogna medullära tymocyter. Markören uttrycks inte av granulocyter.
• CD45RO är en lågmolekylär isoform av CD45RA, ett vanligt leukocytantigen. Det detekteras på T-celler (minnes-T-lymfocyter), en subpopulation av B-lymfocyter, monocyter och makrofager. Monoklonala antikroppar mot CD45RO interagerar med de flesta tymocyter, en subpopulation av vilande CD4+ och CD8+ T-lymfocyter, och mogna aktiverade T-celler. Celler av myelomonocytiskt ursprung, granulocyter och monocyter bär också detta antigen. Det detekteras i centroblastiska och immunoblastiska lymfom.
• CD46 är en O-glykosylerad dimer. Den är vitt distribuerad i vävnader och uttrycks av T- och B-lymfocyter, monocyter, granulocyter, NK-celler, blodplättar, endotelceller och fibroblaster, men saknas på ytan av röda blodkroppar. CD46 ger vävnadsskydd mot komplement.
• CD61 är ett trombocytantigen. Det uttrycks på trombocyter i perifert blod och röd benmärg, såväl som på megakaryocyter och megakaryoblaster. Dess bestämning används som en markör vid akut megakaryoblastisk leukemi. Antigenuttryck saknas eller är undertryckt hos patienter med Glanzmanns trombasteni.
• CD95, även kallat Fas eller APO-1, är ett transmembrant glykoprotein, en medlem av tumörnekrosfaktorreceptorfamiljen. Det uttrycks i betydande mängder på T-lymfocyter (CD4+ och CD8+) i perifert blod och, i mindre utsträckning, på B-lymfocyter och NK-celler. Detta antigen uttrycks också på granulocyter, monocyter, vävnadsceller och neoplastiska celler. Bindning av CD95 till Fas-liganden (CD95L) inducerar apoptos i celler.
• CD95L, eller Fas-ligand, är ett membranprotein som tillhör tumörnekrosfaktorreceptorfamiljen. Detta antigen uttrycks av cytotoxiska T-lymfocyter, NK-celler och mycket ofta tumörceller; det är den huvudsakliga induceraren av apoptos i celler.
• HLA-DR är en monomorf determinant av klass II-molekyler i det humana stora histokompatibilitetskomplexet (HLA). Markören uttrycks på Langerhans-celler, dendritiska celler i lymfoida organ, vissa typer av makrofager, B-lymfocyter, aktiverade T-celler och tymiska epitelceller. Studien av denna markör används för kvantitativ bestämning av aktiverade T-lymfocyter med CD3+ HLA-DR+ fenotyp.

Med hjälp av ett annat urval av monoklonala antikroppar mot markörer är det möjligt att skapa ett fenotypiskt porträtt av celler som är karakteristiska för en given form av leukemi.

Förutom användningen av immunofenotypningsmetoder för diagnostik och differentialdiagnostik av hemoblastoser har deras användning i behandlingsprocessen för att bedöma remissionstillståndet och den kvarvarande populationen av leukemiceller visat sig vara särskilt viktig. Genom att känna till det fenotypiska "porträttet" av blastceller under diagnosperioden gör dessa markörer det möjligt att detektera celler av den leukemiska klonen under remissionsperioden, och genom ökningen av deras antal - att förutsäga utvecklingen av ett återfall långt före (1-4 månader) uppkomsten av dess kliniska och morfologiska tecken.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]