Hemopoietiska stamceller av navelsträngsblod

Navelsträngblod fungerar som en källa till hematopoetiska stamceller på den proliferativa potentialen och repopulationskapaciteten hos hematopoetiska celler. Det har upprepats visat att navelsträngsblod vid tidpunkten för leveransen innehåller ett tillräckligt stort antal dåligt begåvade hematopoietiska stamceller. Vissa författare tror att fördelen med att transplantera hematopoetiska stamceller i trådblod är att det inte finns något behov av att söka efter en givare som är kompatibel med HLA-antigener. Enligt dem, omognad hos nyfödda immunförsvar orsakar minskad funktionell aktivitet av immunkompetenta celler och därmed lägre än vid benmärgstransplantation, incidensen av allvarlig reaktion "graft versus höst". I denna cell transplantation överlevnad av navelsträngsblod inte är lägre än benmärgsceller, även i fallet med användning av ett mindre antal GSK administreras per 1 kg patientvikt. Men enligt vår uppfattning, det optimala antalet frågor transplanterade sladd blodkroppar som behövs för en effektiv engraftment i kroppen hos mottagaren, deras immunologiska kompatibilitet, och ett antal andra aspekter av transplantation av hematopoetiska stamceller från navelsträngsblod kräver mer seriös analys.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Hämta hematopoietiska stamceller av navelsträngsblod

Förfarandet för att erhålla hematopoietiska stamceller av navelsträngsblod kräver dess intag omedelbart efter födelsen och dess separation från moderkakan, när moderkakan är i livmodern eller ex livmodern, samt för kejsarsnitt, men också fritt utero. Det visas att i fallet med en minskning av tiden från födseln till separation av nyfödda från moderkakan till 30 sekunder ökar den erhållna volymen av sladdblod i genomsnitt med 25-40 ml. Med ett senare förfarande försvinner samma mängd blod. Det är uppenbart att den tidiga avskiljningen av barnet från efterbränningen inte medför några negativa konsekvenser för den nyfödda.

Den ryska Institutet för hematologi och blodtransfusion utvecklat en effektiv och billig teknik för både navelsträngsblod vid fysiologiska härstamningar ((70,2 + 25,8) ml) och kejsarsnitt ((73,4 + 25,1) ml). En metod för separation av navelsträngsblod med en tillräckligt högt utbyte av mononukleära celler och kärnbildad - (83,1 + 9,6) och% (83,4 + 14,1), respektive. Förbättrat förfarande för kryokonservering av navelsträngsblod, som garanterar hög säkerhet för mononukleära celler och CFU-GM - (96,8 + 5,7) och (89,6 + 22,6)%, respektive. Effektiviteten av dräneringsmetoden för trådblodprovtagning med användning av "Kompoplast-300" -behållaren (Ryssland) bestämdes. Staket navelsträngsblod författare utförs omedelbart efter födseln och dess separation från moderkakan, när det gäller att placera moderkakan i livmodern eller ex utero. Före punktering av navelsträngsvenen navelsträngen en gång behandlas med 5% tinktur av jod, och sedan två gånger - 70% etylalkohol. Blodet flöde genom anslutningsrören spontant till behållaren. Varaktigheten av staketet tog inte mer än 10 minuter. 66 uppsamlade dränagevolymen metod navelblodprover genomsnitt (72 + 28) ml, och antalet leukocyter i provet medelvärdes fulla - (1,1 + 0,6) x x 107. Analysen av navelsträngsblod för sterilitet (bakteriell kontamination, HIV-1-virus av hepatit B och C, syfilis, och cytomegalovirus-infektion) i endast ett prov identifierades IgG-antikroppar mot hepatit C i en annan studie när moderkakan efter födseln fetalt yta placerades på en speciell ram nedåt, var sladden behandlades med 5% natrium jod och 75% etyl th alkohol. Ånorna i navelsträngen dränerades med en nål från transfusionssystemet (G16). Blodet dränerade i behållaren spontant. Volymen av blod i genomsnitt på detta sätt (55 + 25) ml. Papperet G. Kogler et al (1996) navelsträngsblod tas sluten sätt och erhållna stora volymer av blod - i genomsnitt (79 + 26) ml. Författarna noterar att bland 574 sladd blodprov innehålla ca 7% mindre än 40 ml blod, vilket inte gör det möjligt att använda dem för transplantation. K. Isoyama et al (1996), tar navelsträngsblod genom aktiv exfusion användning sprutor, fick i genomsnitt 69,1 ml blod (navelsträngsblod volymen varierade från 15 till 135 ml). Slutligen tillsattes A. Abdel-Mageed PI medarbetare (1997) genom punovinnoy ven kateterisering erhölls i genomsnitt 94 ml navelsträngsblod (från 56 till 143 ml).

Att minska risken för iatrogen infektion och kontamination av matern sekret utvecklade sluten insamlingssystemet blod baserat på den allmänt använda transfuzioinoy systemet Baxter Healthcare Corp., Deerfield, IL (USA), innehållande 62,5 ml CPDA (citrat-fosfat-dextros med adenin) såsom antikoagulant. Tekniken för framställning av material är av största betydelse för framställning av ett prov kvalitet i förhållande till mängden innehåll och renhet av cellsuspensionen. Av de befintliga metoderna för sladden blodinsamling, kotoryeuslovno klassificeras i stängda, halvöppet och öppet system sleduetotdavat företräde först, som i ett slutet system minskar risken för mikrobiell kontaminering av materialet, såväl som kontaminering av cellsuspension av modercellen betydligt.

A. Nagler och medförfattare (1998) utförde en jämförande analys av effekten av alla tre blodblodprovtagningssystem. I den första varianten utfördes proceduren i ett slutet system genom exfusion av blod direkt i behållaren. I den andra varianten erhölls blodblod genom förfarandet för aktiv blodexfusion av sprutor 1 med ytterligare tvättning av blodkärlens vener och samtidig dränering av blod i behållaren (öppen metod). I den tredje varianten drogs blodet i ett halvöppnat system genom att aktivt extrahera det med sprutor och tvätta genom navelsträngens artär med samtidig exfusion i behållaren. I den första versionen fick författarna navelsträngsblod i volymen (76,4 + 32,1) ml med ett leukocytantal (10,5 + 3,6) x 10 ⁶ per 1 ml blod. I den andra varianten var motsvarande index (174,4 + 42,8) ml och (8,8 + 3,4) x ¹⁰⁶ / ml; i den tredje - (173,7 + 41,3) ml och (9,3 + 3,8) x 10 ⁶ / ml. Den vanligaste infektionen av blodprover i navelsträngen noterades vid användning av ett öppet system. En direkt korrelation mellan placentamassan och volymen extraherat blod upprättas - med ökande placentamassa ökar den uppsamlade mängden blod.

Efter provtagningen av navelsträngsblod följer separationssteget isolering av mononukleära celler och rening av cellsuspensionen från erytrocyter. Under försöksbetingelserna isoleras de kärnbildade cellerna med förfarandet för deras sedimentering med metylcellulosa under lysis av ammonium-erytrocyter med klorid. Men för kliniska ändamål bör metylcellulosa inte användas, eftersom förlusten av hematopoetiska stamceller når 50-90%. Lysering av röda blodkroppar i samband med stora volymer av den verksamma lösningen i kliniken också knappast utföras, även om procentandelen av separation på detta sätt kämförsedda celler med fenotypen av CD34 ^, och progenitorceller CFU-GM-funktioner och CFU-GEMM betydligt högre. Ett nytt medel för isolering av mononukleära celler i densitetsgradientköpantens densitetslösning (BDS72) har rapporterats. Detta ämne har följande fysiologiska parametrar: pH - 7,4, osmolalitet - 280 mosm / kg, densitet - 1,0720 g / ml. Enligt författarna är det med hjälp av det möjligt att isolera upp till 100% av CD34-positiva celler och ta bort 98% röda blodkroppar. Kliniken gäller dock inte BDS72 ännu.

De separationsmetoder testade kärnförsedda celler från navelsträngsblod används typiskt en 10% HES-lösning eller 3% gelatinlösning. Effektiviteten av utfällning av erytrocyter och isolering av kärnbildade celler i båda fallen är ungefär lika. Emellertid, i fallet med användning som ett sedimenterande medel gelatin möjligt att erhålla ett något större antal CFU-GM, än vid användning av HES. Det antas att skillnaden i återvinningseffektiviteten CFU-GM ojämlika hastighet på grund av avsättning av individuella fraktioner eller kärnförsedda celler förmåga HES molekyler absorberade på hematopoetiska cellytereceptorer och således blockera deras känslighet för kolonistimulerande faktorer, som används vid odling CFU-GM in vitro. Icke desto mindre kan både sedimenter väl vara lämpliga för isolering av celler med cellkärna i skapandet av storskaliga navelsträngsblod banker.

Metoder för separation och kryopreservering av navelsträngsblod i princip skiljer sig inte från de som används i arbetet med hematopoetiska stamceller av perifert blod och benmärg hos vuxna givare. Men när man förbereder ett stort antal navelsträngsblodprover för sina banker måste separationsmetoderna för det första vara låga kostnader. Därför används nu tyvärr kliniska metoder för isolering och kryopreservering av navelsträngsblodceller, och effektivare men ekonomiskt effektiva metoder förblir många experimentanter.

I allmänhet fastställdes kriterierna för uppskattning av antalet hematopoietiska celler och kraven för studier av blodprover av navelsträngsblod för att identifiera smittsamma medel. För att säkerställa transplantation av hematopoetiska blodkroppar måste alla blodprover undersökas främst för hematogena infektioner och genetiska sjukdomar. Vissa författare rekommenderar ytterligare särskilda metoder för studier av navelsträngsblod för att diagnostisera genetiska sjukdomar såsom thalassemi och sicklecellanemi, adenosindeaminas-brist, agammaglobulinemi Bruton, sjukdom Harlera och spelaren.

Enligt rekommendationerna Ticheli L. Et al (1998), i varje prov av navelsträngsblod är nödvändig för att bestämma antalet celler med cellkärna, SB34-positiva celler och CFU-GM, bär HLA-typning för att bestämma blodgruppen ABO och Rh dess medlemskap. Dessutom är sådd utförs bakteriologiska, serologiska tester för HIV och CMV-infektion, HBsAg, hepatit C, HTLY-I och HTLV-II (T-cell leukemi, humant), syfilis, toxoplasmos. En polymeraskedjereaktion mot cytomegalovirus och HIV-infektion är obligatorisk.

Självförfarandet för att få sladdblod ska utföras i strikt överensstämmelse med principerna för medicinsk bioetik. Innan blodsamlingen börjar, är det nödvändigt att få den gravid kvinnans samtycke för genomförandet. Preliminär samtal med den gravida kvinnan att få informerat samtycke att utföra alla manipulationer, eftersom blod exfusion fyllning och efterbehandling dokument utförs endast av sjukvårdspersonal. I varje fall avvisas utför någon av dessa förfaranden av personal med biologiska, kemiska, läkemedel och andra icke-medicinsk utbildning, med tanke på brott mot de etablerade normerna för bioetik och mänskliga rättigheter. För positiva test för bärare HBsAg, antikroppar till det orsakande medlet av hepatit C, inte HIV och syfilis navelsträngsblod tas, och de uppsamlade blodproven är redan kasseras och förstöras. Det bör noteras att transport av latenta infektioner hos nyfödda är mycket ovanligare än hos vuxna, därför sannolikheten för hematogen överföring och utveckling av infektiösa komplikationer av hematopoietiska infusioner av sladden blodkroppar är betydligt lägre än i fallet med transplantation av benmärg från vuxna givare.

En viktig punkt vid appliceringen av trådblod i kliniken är utvärderingen av transplantationen, vilken är baserad på att bestämma antalet hematopoetiska stamceller i blodprovet och bloddoserna som krävs för transplantation. Standarder för optimalt antal blodkroppar för navelsträng som krävs för transplantation har ännu inte utvecklats. Det finns ingen allmänt accepterad synpunkt även på sådana rutinparametrar som antalet CD34-positiva celler och CFU-GM. Vissa författare utvärderat potentialen av hematopoetiska celler genom analys av de långsiktiga kulturer med fastställandet av innehållet i kolonibildande enheter som är gemensamma för granulocyter, erytrocyter, monocyter och megakaryocyter - CFU-GEMM.

I kliniska inställningar innefattar dock standardvärderingen av blodtransplantation i blodet vanligen endast bestämningen av antalet kärnbildade eller mononukleära celler.

Förvaring av hematopoetiska stamceller i navelsträngsblod

Några problem finns i tekniken för att lagra blodceller från hematopoetiska blodkroppar. När kryokonservering av hematopoetiska stamceller i syfte att uppnå sin optimala frysmoden måste minimera mängden navelsträngsblod och röda blodkroppar som tidigare avlägsnats för att undvika hemolys och risken för inkompatibilitet reaktion av erytrocytantigener (ABO, Rh). För dessa ändamål är olika förfaranden för isolering av kärnbildade celler lämpliga. I början av 90-talet av förra seklet den mest använda metoden för att separera kämförsedda celler i en densitetsgradient baserad på Ficoll med en densitet av 1,077 g / ml, eller perkolation med densitet 1,080 g / ml. Separation navelsträngsblod genom densitetsgradient gör det möjligt att välja övervägande mononukleära celler men leder till avsevärda förluster av hematopoetiska progenitorceller - upp till 30-50%.

Sedimenteringseffektiviteten hos hydroxietylstärkelse i processen för isolering av navelsträngsblodceller uppskattas på olika sätt. Vissa författare indikerar en låg separationskvalitet med hjälp av denna metod, medan andra forskare tvärtom bland alla möjliga metoder föredrar att fördela HSC-blodblod exakt med en 6% -ig lösning av hydroxietylstärkelse. Detta belyser den höga effektiviteten vid sedimentering av hemopoietiska celler, som enligt vissa data når från 84% till 90%.

Supportrar av en annan synvinkel tror att nästan alla fraktioneringsprocesser involverar stora förluster yadrosoderzhashih celler och erbjuder att göra separation genom centrifugering, separation av navelsträngsblod i 3 fraktioner: erytrocyt, leukocyt och plasma ring. Separering av cellerna på detta sätt, har uppfinnarna funnit att halten av de mononukleära cellerna i tidiga hematopoietiska stamfaderceller och celler med CD34 + immunofenotyp slutligen var respektive 90, 88 och 100% av den ursprungliga nivån. Liknande mängder av renat tillväxt i denna metod för navelsträngsblodceller erhållna genom andra forskare: efter sedimente kämförsedda tilldelats 92%, 98% - mononukleär, 96% - CD34-positiva celler och 106% av kolonibildande enheter.

I slutet av 1990-talet användes gelatin i stor utsträckning som ett sedimenteringsmedel. I klinisk praxis, med användning av gelatin hematopoetiska stamceller isolerade från navelsträngsblod sedan 1994. När man använder en 3% lösning av gelatin når effektiviteten av isoleringen av kärnbildade celler 88-94%. Den utbredda användningen av gelatin vid utvecklingen av blodbanbanan har bekräftat dess fördelar jämfört med andra sedimenteringsmedel. Jämförande analys av alla ovanstående metoder för isolering av kärnförsedda celler i termer av deras sekventiell användning vid var och en av provnavelsträngsblodprover visade att de optimala sedimenter-out mononukleära celler med fenotypen CD34 + / CD45 +, liksom av antalet CFU-GM och CFU-GEMM är 3% gelatinlösning. Det visade sig vara betydligt mindre effektiva metoder med användning av Ficoll densitetsgradient, och användningen av metyl-cellulosa och hydroxietylstärkelse i vilka hematopoietiska cellförlust nådde 60%.

Utbyggnaden av volymen av stamcellstransplantation av navelsträngsblod är inte bara förenad med utvecklingen av metoder för deras produktion utan också för lagring. Det finns många problem som är direkt relaterade till beredningen av navelsträngsblod för långtidsförvaring och valet av optimal cryopreserveringsteknik för dess prover. Bland dem är frågorna av lämpligheten att utföra separationsprocedurer, användningen av olika kryopreserverande medier och användningen av metoder för att förbereda upptintade celler för transplantation. Transport av inhemska prover av trådblod utförs ofta från områden som är avlägsna från hematologiska centra. I samband med detta uppstår problemet om tillåtna perioder för lagring av sladdblod från tidpunkten för mottagandet till början av kryopreservation, vilket är av särskild betydelse för utvecklingen av blodblodbanker.

Studien av den funktionella aktiviteten av hematopoetiska sladd blodkroppar efter långvarig lagring (upp till 12 år) i flytande kväve visade att ca 95% av hematopoetiska celler under denna tid inte förlorar sin höga fortplantningsförmågan. Papperet Yurasova S. Et al (1997) visade att navelsträngsblod förvaras vid rumstemperatur (22 ° C) eller vid 4 ° C under 24 och 48 timmar inte väsentligen minska livsdugligheten hos de hematopoietiska celler som den ursprungliga nivån är lämpligen 92 och 88%. Om lagringstiden förlängs till tre dagar reduceras dock antalet livskraftiga kärnbildade celler i sladdblodet signifikant. På samma gång, andra studier funnit att under lagring under 2-3 dagar vid en temperatur av 22 ° C eller 4 i första hand påverkade viabiliteten hos mogna granulocyter, men inte hemopoietiska celler.

Lönsamheten hos hematopoetiska stamceller i sladdblod kan påverkas negativt av systemkomponenter för insamling. Analys av effekten av olika antikoagulanter, vilken verkningsmekanism är på grund av bindning av kalciumjoner (ACD, EDTA, XAPD-1) för hematopoietiska stamfaderceller i navelsträngsblod lagringsförhållanden av 24 till 72 timmar avslöjade deras negativa inverkan på viabiliteten hos kärnförsedda celler. I detta sammanhang, författarna rekommendera användning av PBS (fosfatbuffertlösning) med tillsats av nativt heparin utan konserveringsmedel i en koncentration av 20 U / ml, som enligt deras åsikt, gör det möjligt att öka lagringstiden ofraktionerat navelsträngsblod upp till 72 timmar och sparar den funktionella aktiviteten för kolonibildande enheter. Men i studien bevarande CFU-GM och CFU-G visat att navelsträngsblod lagring innan frysförvaring bör inte överstiga nio timmar. Självklart, i detta fall bör agera principen att om det finns motstridiga uppgifter bör använda minsta rekommenderade navelsträngsblod lagringstid och startar en programmerbar frysning isolerade celler så fort som möjligt.

Vid frysning av hematopoietiska stamceller av navelsträngsblod används en 10% lösning av DMSO vanligen som en kryoprotektant. Men förutom den uttryckta kryoprotektiva effekten har dimetylsulfoxid i denna koncentration en direkt cytotoxisk effekt, även under förutsättning av minimal exponering för blodbildande celler i navelsträngsblodet. För att minska den cytotoxiska effekten av DMSO appliceras en noll exponeringstemperatur, en ökning av hastigheten på alla manipuleringar och upprepad tvättning efter upptining av navelsträngsprover.

Institutet för hematologi och transfusiologi av Akademin för medicinska vetenskaper i Ukraina har utvecklat en vetenskaplig riktning sedan 1995, vars mål är att studera sladdarblodet som en alternativ källa till stamhomopoietiska celler. I synnerhet har ny teknik för lågtemperaturkryopreservering av hemopoietiska celler av unfractionerat och fraktionerat ledningsblod utvecklats. Som en kryoprotektant används medicinsk polyvinylpyrrolidon med låg molekylvikt. Metoden för kryopreservering av orakstruerat trådblod bygger på den ursprungliga tekniken för förberedelse av celler för frysning och tekniken för särskild behandling av cellsuspension omedelbart före transplantation.

En av de viktigaste faktorerna som påverkar nivået av funktionell aktivitet hos kryopreserverade hemopoietiska stamceller är kylhastigheten för cellsuspension, särskilt under kristallisationsfasen. Ett mjukvaruförfarande för att lösa problemet med hastighet och frysningstid ger stora möjligheter att skapa enkla och mycket effektiva metoder för kryopreservering, utan att tvätta cellsuspensionen från kryoprotektiva medel före transplantation.

Faserna med omedelbar frysning och upptining är farligast för cellernas livskraft under deras förberedelse. Vid frysning av de hemopoietiska cellerna kan en betydande del av dem förstöras vid övergången av det intercellulära mediet från vätskan till fastfas-kristallisationen. För att minska andelen celldöd används kryoprotektiva medel, verkningsmekanismerna och dess skyddande effektivitet har omfattats tillräckligt i den vetenskapliga litteraturen.

En lovande riktning optimeringstekniker av kryokonservering av benmärg och navelsträngsblodkroppar är att kombinera i samma lösning för låga koncentrationer av kryoskyddsmedel med flera olika verkningsmekanismer, till exempel, som verkar på den intracellulära nivån av DMSO och hydroxietylstärkelse eller albumin som har extracellulär omslutande effekt.

För kryokonservering av navelsträngsblodkroppar 20% DMSO-lösning, som är permanent mekaniskt omröring i ett isbad används traditionellt, hälldes långsamt i cellsuspensionen för att uppnå lika (1: 1) volymförhållandet mellan cellsuspensionen och kryoskyddsmedlet. Den slutliga koncentrationen av dimetylsulfoxid är 10%. Celsuspensionen kyles sedan på en mjukvarukryostat med en hastighet av HS / min till -40 ° C, varefter kylhastigheten ökas till 10 ° C / min. Efter att ha nått -100 ° C placeras behållaren med cellsuspensionen i flytande kväve (-196 ° C). Med denna metod för kryopreservering når säkerheten för funktionellt aktiva mononukleära celler efter upptining 85% av den ursprungliga nivån.

Modifieringar av kryopreserveringsmetoder syftar till att minska koncentrationen av DMSO genom att tillsätta hydroxietylstärkelse (slutliga koncentrationer av dimetylsulfoxid och hydroxietylstärkelse är 5% respektive 6%). Hög effektivitet hos denna kombination av kryoprotektiva medel observeras när suspensionen av myeloidceller är frusen, med inte mindre cytoprotektion än med en enda 10% lösning av dimetylsulfoxid. Antalet livskraftiga kärnbildade celler nådde 96,7% av baslinjenivå och deras funktionella aktivitet, uppskattad med antalet CFU-GM, var 81,8%.

Vid användning av dimetylsulfoxid-lösning vid koncentrationer som sträcker sig från 5 till 10% i kombination med 4% hydroxietylstärkelse (slutlig koncentration) fann att bevarandet av CD34-positiva celler i dessa intervall dimetylsulfoxid praktiskt taget oförändrade. Samtidigt under förhållanden för att minska koncentrationen av DMSO 5-2,5% observeras massdöd av navelsträngsblodceller - antalet viabla cellenheter reduceras 85,4-12,2%. Andra författare drog också slutsatsen att det var 5 och 10% lösning av dimetylsulfoxid (i copyright utförandet - i kombination med autologt serum) med maximal effektivitet tillhandahålla cytoprotektion under kryokonservering av navelsträngsblod HSC. Dessutom hög säkerhet sekventiellt frysas och tinas cell markeras i fallet med kombinationen av 5 eller 10% DMSO 4% hydroxietylstärkelse lösning, särskilt vid en kontrollerad kylningshastighet av TOS / min. I en annan papper som används kryoskyddande lösning bestående av tre ingredienser redan - DMSO, renat humant albumin och RPMI-medium i ett förhållande av 1: 4: 5, vilken sattes till cellsuspensionen upp till en lika stor volymförhållanden (slutlig DMSO-koncentration var 5%). Efter avfrostning i ett vattenbad vid en temperatur av + 4 ° C översteg CFU-GMs säkerhet 94%.

Vissa författare föreslår att man använder orakstruerat sladdblod för cryopreservering, eftersom signifikanta mängder hematopoetiska celler försvinner under borttagandet av röda blodkroppar. I denna utföringsform används en 10% lösning av dimetylsulfoxid för att skydda mononukleära celler från de skadliga effekterna av kryokristallisering. Frysning utförs vid en konstant kylningshastighet av HS / min till -80 ° C, varefter suspensionen av navelsträngsblodceller är nedsänkt i flytande kväve. Med denna metod för frysning sker en partiell lys av erytrocyterna, därför kräver blodprover inte fraktionering. Efter upptining tvättas cellsuspensionen från fri hemoglobin och dimetylsulfoxid i en lösning av humant albumin eller i patientens autologa serum och används för transplantation.

Bevarande av hematopoetiska progenitorceller efter avfrostning ofraktionerat navelsträngsblod är faktiskt högre än fraktione, men i samband med krioustoychivostyu av de röda blodkropparna kan orsaka allvarliga problem på grund av post-transfusion Transfusion av ABO-inkompatibla röda blodkroppar. Dessutom ökar volymen av lagrat oraktionerat blod signifikant. Från en klinisk synvinkel, ännu mer föredraget kryokonservering tidigare isoleras och renas från andra cellulära fraktioner av navelsträngsblod hematopoietiska celler.

I synnerhet, är en metod kryokonservering av navelsträngsblodkroppar som fraktione tillåter avlägsna erytrocyter som förberedelse för frysning, som använder en 6% lösning av hydroxietylstärkelse i kompositionen plazmozameshchath lösningen "Stabizol". Efter upptining är den sålunda erhållna cellsuspensionen klar för klinisk användning utan ytterligare manipulering.

Således finns det för närvarande många ganska effektiva sätt att kryopreservera navelsträngsblod. Den huvudsakliga skillnaden är att blodprover frystes orakylerade eller utsätts för separation i cellfraktioner under beredningssteget och skördade kärnbildade celler utan tillsats av erytrocyter.

Transplantation av hemopoietiska stamceller av navelsträngsblod

I slutet av 80-talet - början av 90-talet av förra seklet upptäcktes att navelsträngsblocket som ger fostret under graviditeten kännetecknas av ett högt innehåll av hematopoetiska stamceller. Den relativa enkelheten att erhålla navelsträngsblodceller och frånvaron av uppenbara etiska problem främjade användningen av stamceller från stamceller i praktiskt läkemedel. Den första framgångsrika transplanteringen av sladdblod till ett barn med Fanconi anemi tjänade som utgångspunkt för att expandera volymerna av stamcellstransplantation av stamceller och skapa ett system för bankansättning. I det globala systemet med trådblodbanker är den största New York Center for Placental Blood, som står på balansräkningen för National Institutes of Health. Antalet lagrade blodprover i denna bank närmar sig 20 LLC. Antalet mottagare (främst barn) växer också, och framgångsrik transplantation har utförts. Enligt den amerikanska hälsodepartementet har den återkommande perioden efter transplantationslivet hos mottagare av HSC-blodblod redan överskridit 10 år.

Detta är inte förvånande, eftersom ett stort antal studier av hematopoetisk potential navelsträngsblod har visat att kvantitet och kvalitet av de tidigaste stamceller är inte bara sämre än en vuxen människa benmärg, men också av vissa åtgärder överskrider det. En högre proliferativ potential stamceller från navelsträngsblod orsakade utvecklingscellsignaleringsfunktioner, förekomsten av receptorer på HSC: er mot specifika tillväxtfaktorer, kapaciteten av navelsträngsblodkroppar för att autokrin produktion av tillväxtfaktorer, den stora storleken och längden av telomerer.

Således iska och fenotypiska egenskaper hos de hematopoietiska stamceller från navelsträngsblod förutbestämd kvalitet engraftment hög potential donator hematopoetisk återhämtning hos mottagaren.

Fördelar med hematopoetiska stamceller av navelsträngsblod

Bland de verkliga fördelarna med att använda hematopoetisk stamceller från navelsträngsblod för transplantation jämfört med andra källor till hematopoetiska celler det bör noteras nästan noll risk för hälsan hos givaren (om den inte betraktas som en sådan placenta), samtidigt som man eliminerar behovet av narkos. Användningen av navelsträngsblod celltransplantation expanderar på grund delvis av HLA-kompatibel transplantatsystemet (inkompatibiliteter från en till tre antigener). Tekniken med långtidslagring av hematopoietiska navelsträngsblod celler i fryst tillstånd, vilket ökar sannolikheten för att erhålla sällsynt HLA-typ och minskar söktid HLA-matchad allogen transplantation. Samtidigt minskas risken för att utveckla vissa latenta infektioner som sänds via överföringsvägen avsevärt. Dessutom finns det en billig form av biologiskt liv försäkring i samband med möjligheten att använda navelsträngsblodceller för autolog transplantation.

Men eftersom små volymer av blod som kan samlas in från moderkakan (i genomsnitt inte mer än 100 ml) i förgrunden problemet att erhålla den maximalt möjliga mängden blod från navelsträngen ven i strikt överensstämmelse med villkoren för minimal risk för bakteriell kontaminering av navelsträngsblod härledda prover.

Primitiva hematopoietiska celler från navelsträngsblod är i allmänhet identifieras genom närvaron på sin yta glikofosfoproteina CD34, och på grundval av deras funktionella egenskaper genom att undersöka den klonogena analysen eller kolonibildning in vitro. Jämförande analys visade att i navelsträngsblod och benmärg maximihalt av CD34-positiva mononukleära celler i fraktionen är 1,6 och 5,0%, den maximala nivån av kolonibildande enheter i en subpopulation av CD34 + celler respektive - 80 och 25%, totalt kloningseffektivitet av CD34 + -celler - 88 och 58%, den maximala kolonibildande celler med hög proliferativ potential (HPP-CFC i -populyatsii CD34 +) - 50 och 6,5%. Det bör tilläggas att kloningseffektiviteten av CD34 + CD38-celler och förmågan att svara på cytokinstimulering också högre i hematopoetiska stamceller av navelsträngsblod.

Kombinations fenotypiska antigener Thy-1, CD34 och CD45RA bekräftar den höga proliferativa kapaciteten hos navelsträngsblod hematopoietiska celler, och uttryck av de tre antigenerna på ytan av de navelsträngsblodceller indikerar att de tillhör den stamcell. Också det sig att navelsträngsblod innehåller celler med fenotypen av CD34 ^, utan några linjära differentieringsmarkörer. Nivå i navelsträngsblodcellunderpopulationer med den fenotypiska profilen av CD34 + / Lin är ungefär 1% av det totala antalet CD34-positiva celler. Hematopoetiska progenitorceller ger upphov till den navelsträngsblod som en lymfoida cellinjer, och ett antal linjär pluripotent myeloid celldifferentiering, vilket också tyder på att de hör till de stamceller.

Som redan nämnts är de väsentliga skillnaderna mellan benmärg och blodblod mängden hematopoetiska celler som används för transplantation, erhållna med ett förfarande. När benmärgstransplantation förlust av cellmassa i separationsprocessen, kryokonservering, upptining och testning är tillåtna i intervallet 40-50%, är sladden blodkroppar sådan förlust mycket betydande, eftersom vid användning av det otillräckliga antalet HSC transplantation kan vara ohållbar. Enligt G. Kogler et al (1998), för celltransplantation i mottagarens kroppsvikt av 10 kg potentiella transplantations (totalt antal av de uppsamlade sladd blodprov - 2098) kan vara alla navelsträngsblod prover, kroppsvikt 35 kg - 67%, och endast 25% av proven kommer att kunna tillhandahålla effektiv transplantation hos patienter med en kroppsvikt på 50-70 kg. Denna kliniska situation indikerar behovet av att optimera och förbättra effektiviteten hos befintliga metoder för provtagning, reproduktion och lagring av navelsträngsblodceller. Därför är frågorna om standardisering av provtagningsmetoder, provning, separation och kryokonservering av navelsträngsblod nu allmänt diskuterats i litteraturen för skapandet av blodbanker, dess användning i kliniken, samt fastställande av villkor och innehåll i lagring av hematopoietiska stamceller från navelsträngsblod.

[7], [8], [9],

Användningen av hematopoetiska stamceller av navelsträngsblod i medicin

Vanligtvis kan upp till 10 ⁶ hematopoetiska stamceller isoleras från navelsträngsblod , sällan mer. I samband med detta, fram till idag, kvarstår frågan om tillräckligheten för så många blodkroppar för hematopoetisk blodkropp för att återställa hematopoiesen hos den vuxna mottagaren. Yttranden om denna fråga var uppdelade. Vissa forskare tror att denna mängd är tillräcklig för transplantations barn, men för liten för att transplantera vuxen människa, för vilken administreringen är optimal (7-10) x 10 ⁶ CD34-positiva celler per 1 kg kroppsvikt - genomsnitt av 7 × 10 ⁸ per transplantation. Av dessa beräkningar följer att ett navelsträngsprov innehåller 700 gånger mindre hematopoetiska stamceller än vad som krävs för en transplantation till en vuxen patient. En sådan kvantitativ bedömning görs emellertid analogt med antalet transfuserade celler i benmärgen och ignorerar fullständigt de ontogeniska egenskaperna hos hematopoiesis.

I synnerhet ingen hänsyn till det faktum att ju högre proliferativ kapacitet av hematopoietiska stamceller från navelsträngsblod jämfört med hematopoietiska progenitorceller av benmärgen. Resultaten i kolonibildande vitro potential tyder på att en enda dos kan ge navelsträngsblod hematopoietisk återuppbyggnad av vuxna mottagare. Å andra sidan, får vi inte glömma att antalet HSCs minskar även i processen för embryonal utveckling: innehållet av CD34-positiva celler i navelsträngsblod linjärt reducerad 5 gånger under en period av 20 veckor (blod för studien erhölls vid för tidig abort) till 40: e graviditetsveckan (perioden för fysiologisk arbetskraft), åtföljd paralellno permanent ökande linjär cytodifferentiation expressionsmarkörer.

På grund av avsaknaden av en standardiserad metod för kvantifiering i navelsträngsblodprover från stamceller kontrovers över den optimala dosen av hematopoetiska stamceller från navelsträngsblod fortsätter. Vissa forskare tror att så urvalskriterierna av navelsträngsblodprover kan användas antalet celler med cellkärnor och mononukleära celler, räkna på mottagarens kroppsvikt, det vill säga sin dos. Vissa författare anser att det minsta kvantitativa tröskelvärdet för CD34 + -celler, även för att genomföra autolog transplantation av HSC, är 2 x 10 ⁶ / kg. Ökningen av dosen av hematopoetiska celler till 5 x 10 ⁶ celler / kg (totalt 2,5) redan ger en mer lämplig för tidig perioden efter transplantation, minskar förekomsten av infektiösa komplikationer och förkortar perioden för förebyggande antibiotikabehandling.

Enligt E. Gluckman et al (1998) i hematologi för framgångsrik transplantation av navelsträngsblodkroppar det är införandet av minst 3,7 x 10 ⁷ kärnförsedda celler per 1 kg kroppsvikt hos mottagaren. Genom att reducera dosen av hematopoetiska stamceller till en × 10 ⁷ eller mindre av kärnförsedda celler per 1 kg kroppsvikt hos patienten och risk för transplantat misslyckande återkommande cancrar blod ökar dramatiskt. Det bör noteras att det minsta antalet stamceller som krävs för en snabb återhämtning av blodbildningen efter allotransplantation GSK, är fortfarande okänd. Teoretiskt detta kan uppnås med användning av en enda cell, men i klinisk benmärgstransplantation snabb och stabil engraftment garanterad transfusion minst (1-3) x 10 ⁸ kärnförsedda celler per 1 kg patientkroppsvikt.

En nyligen detaljerad studie för att bestämma den optimala mängden HSC i onkohematologi inkluderade observationen av patienter av tre grupper isolerade beroende på innehållet av CD34-positiva celler i transplantationsmaterialet. Patienter från den första gruppen fick (3-5) x ¹⁰⁶ celler / kg. GSK dosen hos patienter i den andra gruppen uppgick till (5-10) x 10 ⁶ celler / kg och den tredje gruppen av patienter transplanterade mer än 10 x 10 ⁶ CD34 + celler / kg. De bästa resultaten observerades i gruppen av mottagare som fick en transplantation med antalet CD34-positiva celler lika med (3-5) x ¹⁰⁶ / kg. Med en ökning av dosen transplanterade celler över 5 × ¹⁰⁶ / kg identifierades inga statistiskt signifikanta fördelar. Således mycket stora innehålls HSCs i transplantatet (> 10 x x 10 ⁶ / kg) var associerad med en signifikant mängd kvarvarande återinfusion av tumörceller, vilket leder till återfall av sjukdomen. Det fanns inget direkt samband mellan antalet transplanterade allogena stamceller och utvecklingen av "graft versus host" -reaktionen.

Den ackumulerade världserfarenheten av transplantation av HSC-blodblod bekräftar deras höga repopulationspotential. Inriktningshastigheten för blodtransplantatbandet korrelerar med antalet införda kärnbildade celler. De bästa resultaten observeras med en transplantation av 3 × 10 ⁷ / kg, medan för benmärgen är denna dos 2 × 10 ⁸ / kg. Enligt uppgifterna från koordinationscentralerna genomfördes i slutet av 2000 1200 transplantationer av navelsträngsblodceller i världen, främst från givarrelaterade (83%). Självklart bör ledningsblod betraktas som ett alternativ till benmärgen för transplantation till patienter med hemoblastos.

Emellertid, neonatal natur Cordova källa av hematopoetisk vävnad uppmuntrande på grund av närvaron av funktionella egenskaper hos dess GCW. Dock kan endast klinisk erfarenhet ge ett svar på frågan om lämpligheten av ett prov av navelsträngsblod för vuxen hematopoietisk ombildning av mottagaren med aplasi av blodbildningen. Transplantation av navelsträngsblodkroppar används vid behandling av många sjukdomar i tumör och icke-tumör natur: leukemier och myelodysplastiska syndrom, non-Hodgkins lymfom och neuroblastom, aplastisk anemi, medfödda Fanconi anemi och Diamond Black fan, brist på leukocytadhesion, Barr syndrom, Gunther sjukdom Harlera syndrom, talassemi .

Noggrann uppmärksamhet och separat forskning förtjänar de immunologiska aspekterna av transplantation av blodbildande celler i navelsträngsblodet. Det visas att i fallet med transplantation av stamceller från navelsträngsblod från donatorer med ofullständiga HLA-matchade transplantationsResultaten ganska tillfredsställande, att, enligt författarna, vilket indikerar en lägre immunoreaktivitet navelsträngsblod än benmärg.

En detaljerad studie av den cellulära sammansättningen av navelsträngsblod visade funktioner i både fenotypisk spektrum av effektorceller i immunsystemet och deras funktionella aktivitet, gör det möjligt att överväga navelsträngsblod som en källa till HSC: er med relativt låg risk för reaktion "graft versus höst". Ytterligare funktioner Funktionell omognad immunnavelsträngsblodkroppar bör noteras obalans av cytokinproduktionen och en minskning av känsligheten för cytokiner ny reglering av immunsvaret. Den resulterande inhiberingen av cytotoxisk lymfocytaktivitet anses vara en faktor som bidrar till bildandet av immunologisk tolerans mot den transplanterade hemopoietiska vävnaden. I en population av navelsträngsblodlymfocyter, i motsats till det perifera blodet och benmärg från vuxna givare, dominerade inaktiva, omogna celler och suppressorceller. Detta indikerar en minskad tillgänglighet av blod-blod-T-lymfocyter till immunsvaret. En viktig egenskap hos monocytpopulationen av navelsträngsblodceller är det låga innehållet av funktionellt fullständiga och aktiva antigen-presenterande celler.

Å ena sidan, en låg grad av mognad av effektorceller i immunsystemet i navelsträngsblod avläsningar sträcker sig till dess användning i kliniken, eftersom dessa funktioner kan den minskning av intensiteten av immun konflikt mellan donator- och mottagarceller. Men, å andra sidan vet vi att det finns ett samband mellan graden av reaktion "graft versus host disease" och transplantationsantitumöreffekten, dvs effekten av utvecklingen av "graft-versus-leukemi". I samband med detta utfördes en undersökning av antitumoral cytotoxicitet hos navelsträngsblodceller. Resultaten tyder på att, trots den verkligen försvagat immunsvar av navelsträngsblodkroppar till antigenstimulering, aktiveras i första hand är de naturliga mördarceller och killeropodobnymi celler som är aktivt involverade i mekanismer för genomförandet av det antitumör cytotoxicitet. Dessutom i navelsträngsblod lymfocytsubpopulationer påträffades med fenotypen CD16 + CD56 + och CD16 "TCRA / p +. Det antas att dessa celler är i en aktiverad form genomföra reaktion" transplantat-mot-leukemi".

Vid Institutet för onkologi, Academy of Medical Sciences i Ukraina frysförvarade hematopoetiska celler från navelsträngsblod administrerades till cancerpatienter med ihållande hypoplasi av hematopoiesis på grund av kemoterapi och strålbehandling. Hos dessa patienter, transplantation av hematopoietiska stamceller från navelsträngsblod effektivt återställda blod förtryck, vilket framgår av ihållande förhöjning av mogna bildade element i det perifera blodet, såväl som en ökning i indikatorer som kännetecknar tillståndet för cellulär och humoral immunitet. Stabilitet repopulyatsionnogo effekt efter transplantation av hematopoietiska navelsträngsblod celler möjliggör för fortsatt strålning och kemoterapi, utan att avbryta behandlingen. Det finns bevis för patienter stamceller navelsträngsblod cancer större effektivitet allograft: den årliga risken för återfall av en tumör i deras användning var 25% mot 40% hos patienter med en transplanterad allogen benmärgs genen.

Verkningsmekanismen av kryokonserverade stamceller från navelsträngsblod bör betraktas som resultatet av ett humoralt stimulering av hematopoes mottagare som orsakas av den unika förmågan hos neonatala celler att autokrin produktion av hematopoietiska tillväxtfaktorer, såväl som en följd av den tillfälliga inympning av givarceller (som en bekräftelse - en signifikant ökning av halten av perifert blod fetalt hemoglobin mottagaren 7-15 e dagen efter transfusion jämfört med baseline). Frånvaro i mottagare av navelsträngsblod efter-transfusionsreaktioner - resultat av dess relativa tolerans av immunceller, samt det förtroende kriteriet användbarheten av kryokonserverade biologiskt material.

Progenitorceller T lymfocyter killer navelsträngsblod som kan aktiveras under inverkan av exogen cytokin stimulering som används för att utveckla nya ex vivo och in vivo-metoder för att inducera antitumör cytotoxiska lymfoidceller för efterföljande transplantation immunoterapi. Dessutom har "omognad" av genomet av navelblodimmunceller tillåter deras användning för att öka antitumöraktivitet genom molekylär modellering.

Idag har sladdblod funnit bred applicering främst inom pediatrisk hematologi. Hos barn med akut leukemi allotransplantation av hematopoietiska stamceller från navelsträngsblod jämfört med benmärgsallotransplantat, minskar signifikant incidensen av reaktion "graft versus höst". Det är dock noteras under en lång period av neutropeni och trombocytopeni, och tyvärr, en högre nivå av 100-dagarsmortaliteten efter transplantation. En längre period av återhämtning i de perifera blod granulocyter och trombocyter kan bero på otillräcklig differentiering av enskilda subpopulationer av CD34-positiva celler av navelsträngsblod, vilket framgår av den låga graden av absorption av radioaktivt rodamin och låg expression av CD38-antigener på sin yta.

På samma gång, transplantation av hematopoietiska stamceller av navelsträngsblod av vuxna patienter, som utförts på grund av brist på både en kompatibel obesläktad benmärgsdonator, samt möjligheter att mobilisera autologa HSC uppvisade hög årliga skovfria överlevnaden hos patienter yngre än 30 år (73%) . Expansions mottagaren åldersintervall (18-46 år) minskade överlevnaden till 53%.

Kvantitativ analys av celler med fenotypen CD34 ^ benmärg och navelsträngsblod visade högre (3,5 gånger) deras innehåll i benmärgen, men navelsträngsblod visade en signifikant övervikt av celler med fenotypisk profil av CD34 + HLA-DR .Izvestno, chtokletkikrovisimmunologicheskimi markörer CD34 + HLA-DR proliferera mer aktiv än celler med immunofenotyp CD34 + HLA-DR +, vilket bekräftas i experimentella studier av tillväxten av långvarig odling av hematopoietiska celler in vitro. Primitiva cellprogenitorer med fenotypen CD34 + CD38 som finns i navelsträngsblod och benmärg, men navelsträngsblodceller med markören inställd CD34 + CD38 har högre klonogen aktivitet än hematopoietiska celler av samma fenotyp, isolerad från vuxen donator benmärg. Dessutom kommer navelsträngsblodceller med CD34 + CD38 immunofenotyp prolifererar som svar på stimulering med cytokiner (IL-3, IL-6, G-CSF) och reproducera 7 gånger fler kolonier i de långsiktiga kulturer än benmärgsceller.

Banker av stamceller från blodkroppar

För korrekt utveckling av det nya området praktisk medicin - transplantation av stamceller från navelsträngsblod, liksom att utföra transplantationer av hematopoetiska benmärgsstamceller, måste du ha ett omfattande nätverk av blodbanker, som redan är etablerade i USA och Europa. Intra-statliga nätverk av trådblodbanker förenas av Association of Netcord Banks. Möjligheten att inrätta en internationell sammanslutning av navelsträngsblod banker bestäms av det faktum att för att utföra obesläktade transplantationer behöver ett stort antal prov av navelsträngsblod skrivit, gör det möjligt att välja den HLA-identisk donator. Bara inrättandet av ett system av banker med lagring av blodprover av olika HLA-typer i dem kan verkligen lösa problemet med att hitta den nödvändiga givaren. Organisationen av ett sådant system av trådblodbanker kräver en preliminär utveckling av etiska och rättsliga normer, som för närvarande diskuteras på internationell nivå.

För att skapa blodbankbanker i Ukraina är det nödvändigt att utarbeta ett antal bestämmelser och dokument.

Först och främst är det frågor som standardiserar metoderna för provtagning, fraktionering och frysning av navelsträngsblod. Det är nödvändigt att reglera navel insamling navelsträngsblod regler på sjukhus, i enlighet med kraven i medicinsk etik, för att bestämma den minsta mängd av navelsträngsblod, vilket ger en lyckad transplantation. Det bör jämföras med och standardisering av olika kriterier för kvalitetsutvärdering och antalet hematopoetiska progenitorceller samt HLA-typningsmetoder och metoder för diagnos av genetiska och smittsamma sjukdomar som kan överföras genom infusion av navelsträngsblodkroppar ange allmänna urvalskriterier friska donatorer. Det är också värt att diskutera skapandet av separata lagringsanläggningar för serum, celler och DNA som härrör från trådblod.

Det är absolut nödvändigt att organisera ett datanätverk av data om sladdblod för genomförandet av förhållandet med registren över benmärgsgivare. För att vidareutveckla celltransplantationen bör särskilda protokoll för att jämföra resultaten av trådblod och benmärgstransplantation från HLA-identiska släktingar och orelaterade givare utvecklas. Vid behandling av etiska och juridiska problem i kliniska användningen av navelsträngsblod celler kan hjälpa standardisera dokumentation, bland annat informerat samtycke av föräldrarna, samt meddelande om modern eller släktingar till barnet identifieras genom genetisk och / eller infektionssjukdomar.

Den avgörande förutsättning för utvecklingen av celltransplantation i Ukraina kommer att bli antagandet av det nationella programmet för donation av stamceller och utveckling av det internationella samarbetet med andra länder genom World Association of donator benmärg (WMDA), National USA donator benmärg program (NMDP) och andra register.

Generalisera fortfarande korta historia hematopoetisk stamcellstransplantation av navelsträngsblod, kan vi konstatera att den första förutsättningen för möjligheten att klinisk tillämpning av navelsträngsblod, gjorde i början av 70-talet, bekräftades på 80 år resultaten av experimentella studier på djur, och 1988 år har genomfört världens första transplantation av hematopoetiska celler av humant navelsträngsblod och sedan började utveckla ett globalt nätverk av navelsträngsblod banker. Efter 10 år, antalet patienter med transplanterade hematopoietiska celler, navelsträngsblod närmare till 800. Bland dem fanns patienter med olika tumörsjukdomar (leukemi, lymfom, fasta tumörer) och icke-tumör (kongenital immunbrist, anemi, sjukdomar associerade med metaboliska störningar) natur.

I trådblod är innehållet i tidiga och begåvda cellprogenitorer högre än i en vuxnas perifera blod. Med antalet granulocyt-makrofag kolonibildande enheter och deras proliferativa potential av navelsträngsblod är mycket större än det perifera blodet hos vuxna, även efter administrering av tillväxtfaktorer. I långvariga cellkulturer in vitro fanns en större proliferativ aktivitet och livskraft hos navelsträngsblodceller än benmärgsceller. De kritiska ögonblick i transplantation av navelsträngsblodstamceller är hematopoietiska potentiella antalet och kärnförsedda celler, närvaro av cytomegalovirusinfektion, HLA-kompatibel givaren och mottagaren, kroppsvikt och ålder hos patienten.

Emellertid bör transplantation av stamceller från navelsträngsblod betraktas som ett alternativ till benmärgstransplantation för behandling av allvarliga blodsjukdomar, särskilt hos barn. Kliniska problemen med transplantation av navelsträngsblodkroppar successivt lösas - det finns redan ganska effektiva provtagningstekniker separation och kryokonservering av navelsträngsblodceller, förutsatt att villkoren för bildandet av navelsträngsblod banker är de testmetoder förbättrad kärnförsedda celler. Optimal separation under de storskaliga förform navelsträngsblod hematopoietiska stamceller i upprättandet av bankerna bör betraktas som en 3% lösning av gelatin och 6% hydroxietylstärkelse lösning.

Perehrestenko P. Et al (2001) med rätta påpeka att transplantation av stamceller från navelsträngsblod bör inta sin rätta plats i de komplexa terapeutiska åtgärder för att övervinna den nedtryckning av hematopoies av olika ursprung, såsom GSK navelsträngsblod skiljer sig i ett antal betydande fördelar, bland vilka viktigt är den relativa lätthet för skörd, finns det ingen risk för givaren, låg förorening av neonatala celler med virus och relativt låga kostnaden för transplantationen. Vissa författare föreslår att transplantation av navelsträngsblodkroppar mindre ofta än benmärgsceller åtföljs av komplikationer i samband med reaktionen av "graft versus höst", vilket beror, enligt deras uppfattning, en svag expression i sladden blodceller av HLA-DR-antigener och deras omogenhet. Icke desto mindre, den huvudsakliga populationen av kärnförsedda celler från navelsträngsblod är T-lymfocyter (SDZ-positiva celler), vars innehåll är omkring 50%, vilket är 20% mindre än i det perifera blodet av en vuxen, men de fenotypiska skillnader av subpopulationer av T-celler från dessa källor är försumbar.

Bland de faktorer som direkt påverkar överlevnaden av stamcellstransplantation av navelsträngsblod, bör vi notera en ålder av patienterna (de bästa resultaten ses i mottagare i åldern upp till 5 år), tidig diagnos av sjukdomen och en form av leukemi (effektivitet är signifikant högre i akut leukemi). Av stor vikt är dosen av nukleerade navelsträngsblodceller, liksom deras HLA-kompatibilitet med mottagaren. Det är ingen analys av den kliniska effekten av navelsträngsblod transplantation GSK i onkologi och hematologi olycka visar de bästa resultaten av behandling med relaterade transplantationer: ett års sjukdomsfri överlevnad i detta fall når 63%, medan den oberoende transplantation - endast 29%.

Sålunda, närvaron av ett stort antal stamceller i navelsträngsblod och hög repopulyatsionnaya förmåga neonatala hematopoietiska stamceller gör dem lämpliga för allogen transplantation hos patienter med hematologiska maligniteter. Observera dock att rekapitulation av blodbildningen efter transplantation av hematopoetiska stamceller från navelsträngsblod "sträcks i tiden": återställa innehåll i perifert blod neutrofiler sker oftast i slutet av den 6: e veckan, och trombocytopeni fenomen försvinner, vanligtvis efter 6 månader. Dessutom behöver de omogna blodbildande celler av navelsträngsblod inte utesluta immunologisk konflikt: allvarligt förlopp av akut och kronisk reaktion "graft versus höst" observeras i respektive 23 och 25% av mottagarna. Återfall av akut leukemi vid slutet av det första året efter transplantation av navelsträngsblodceller noteras i 26% av fallen.

[10], [11]