Medicinsk expert av artikeln
Nya publikationer
Polymorfismanalys av restriktionsfragmentlängd
Senast recenserade: 05.07.2025
Allt iLive-innehåll är mediekontrollerat eller faktiskt kontrollerat för att säkerställa så mycket faktuell noggrannhet som möjligt.
Vi har strikta sourcing riktlinjer och endast länk till välrenommerade media webbplatser, akademiska forskningsinstitut och, när det är möjligt, medicinsk peer granskad studier. Observera att siffrorna inom parentes ([1], [2] etc.) är klickbara länkar till dessa studier.
Om du anser att något av vårt innehåll är felaktigt, omodernt eller på annat sätt tveksamt, välj det och tryck på Ctrl + Enter.
Den utbredda användningen av olika restriktionsendonukleaser för analys av kromosomalt DNA har avslöjat den enorma variationen i det mänskliga genomet. Även små förändringar i de kodande och reglerande regionerna hos strukturella gener kan leda till att syntesen av ett visst protein upphör eller till att dess funktion i människokroppen förloras, vilket vanligtvis påverkar patientens fenotyp. Emellertid består cirka 90 % av det mänskliga genomet av icke-kodande sekvenser, som är mer variabla och innehåller många så kallade neutrala mutationer, eller polymorfismer, och inte har något fenotypiskt uttryck. Sådana polymorfa regioner (loci) används vid diagnos av ärftliga sjukdomar som genetiska markörer. Polymorfa loci finns i alla kromosomer och är kopplade till en specifik region av genen. Genom att bestämma lokaliseringen av ett polymorft locus är det möjligt att fastställa vilken gen som är associerad med den mutation som orsakade sjukdomen hos patienten.
För att isolera polymorfa DNA-regioner används bakteriella enzymer - restriktaser, vars produkt är restriktionsställen. Spontana mutationer som uppstår i polymorfa ställen gör dem resistenta eller, omvänt, känsliga för verkan av ett specifikt restriktas.
Mutationsvariabilitet i restriktionsställen kan detekteras genom att ändra längden på restriktionsfragment av DNA genom att separera dem med hjälp av elektrofores och efterföljande hybridisering med specifika DNA-prober. I frånvaro av restriktion i ett polymorft ställe kommer ett stort fragment att detekteras på elektroforegram, och i dess närvaro kommer ett mindre fragment att finnas närvarande. Närvaron eller frånvaron av ett restriktionsställe i identiska loci av homologa kromosomer möjliggör ganska tillförlitlig märkning av den mutanta och normala genen och spårning av dess överföring till avkomma. Således, när man studerar DNA från patienter i båda kromosomerna där ett restriktionsställe finns i en polymorf region, kommer korta DNA-fragment att detekteras på elektroforegrammet. Hos patienter som är homozygota för en mutation som ändrar det polymorfa restriktionsstället kommer längre fragment att detekteras, och hos heterozygota patienter, korta och långa fragment.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]